2021 Fiscal Year Research-status Report
Construction of basophil/liposome hybrid secretory system and its application to cell therapy and DDS.
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20K21906
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| Research Institution | Nagoya City University |
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Principal Investigator |
平嶋 尚英 名古屋市立大学, 医薬学総合研究院(薬学), 教授 (10192296)
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| Project Period (FY) |
2020-07-30 – 2023-03-31
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| Keywords | 分泌細胞 / 巨大リポソーム / 人工細胞 / 細胞治療 / DDS |
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| Outline of Annual Research Achievements |
人工系（細胞サイズの巨大リポソーム）と生細胞系（好塩基球 RBL-2H3）の融合
巨大リポソームと好塩基球の融合を、細胞融合装置(ECFG21、ネッパジーン)を、Saitoらの方法を用いて行った。Saitoらの実験条件では、融合のための直流パルスの印加によって細胞サイズの巨大リポソームが壊れることが判明したため、まずは、直流パルスの印加によって巨大リポソーム崩壊が誘導されない直流パルスの条件を決定した。
次に、巨大リポソームの膜を蛍光色素NBDで標識したホスファチジルエタノールアミン(NBD-PE)で可視化し、RBL-2H3と融合させた。交流電圧、直流パルスの条件を検討し、いくつかの条件で、巨大リポソームとＲＢＬ細胞が融合したように見える条件を見出した。しかしながら、蛍光顕微鏡による蛍光標識リン脂質のRBL細胞膜への拡散が認められず、巨大リポソームとＲＢＬ細胞の融合の確証が得られなかった。
そこで、ＲＢＬ細胞の方も蛍光で可視化するために、ＲＢＬ細胞に含まれる分泌顆粒を赤色蛍光リソトラッカーで染色して融合させたが、分泌顆粒の巨大リポソーム内への拡散が認められず、融合の確証が得られなかった。
現在、ＲＢＬ細胞をHoechst33342で核染色し、巨大リポソームは膜をNBD-PEで、内部の水層を水溶性の蛍光色素であるカルセインで染色し、巨大リポソームとＲＢＬ細胞の融合を３種の蛍光色素の位置関係を解析することによって検証する系の確立を行っている。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
巨大リポソームとRBL細胞を融合させるために印加する直流パルスによって巨大リポソームが崩壊することが明らかとなり、リポソームの脂質組成と直流パルスの印加条件の検討に時間を要した。
また、巨大リポソームとRBL細胞が融合したことを示す指標としていた蛍光標識リン脂質膜のRBL細胞膜への側方拡散や、RBL内の分泌顆粒の巨大リポソーム内への拡散が明確には観察されず、両者の融合の証拠となる評価系の再設計が必要となったため。
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| Strategy for Future Research Activity |
ＲＢＬ細胞のHoechst33342による核染色、巨大リポソームのNBD-PEとカルセインによる二重染色の、合計三重染色で、巨大リポソームとＲＢＬ細胞の融合を３種の蛍光色素の位置関係を解析することによって検証する系を構築したので、この系を用いて、効率の良い人工-生細胞融合ハイブリッド系の調製を確立する。
得られた、ハイブリッド系に対して、外界認識能と分泌能の保持を確認し、ＤＤＳとしてのハイブリッド分泌系を得る。
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| Causes of Carryover |
次年度使用額は、１万円未満と少額であり、研究計画通りに使用されいる。
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