2022 Fiscal Year Annual Research Report
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20K22655
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
苅田 聡 大阪大学, 大学院医学系研究科, 助教 (50883526)
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| Project Period (FY) |
2020-09-11 – 2023-03-31
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| Keywords | ゴルジ体 / 糖鎖修飾 / 形態学 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
ゴルジ体は多彩な糖鎖修飾を行うオルガネラであり、数多の糖転移酵素が局在している。しかし、ゴルジ体の中で糖転移酵素がどのように区画化され、制御されているのかについては明らかとなっていない。本研究の最終年度において以下の点について成果が得られた。
1)糖転移酵素のゴルジ体内の分布を調べるために、超解像検出技術であるSTORMを用いて得られた輝点分布データについてDBSCANとKDEを組み合わせて解析を行い、各々のクラスターの面積を測定した。今回測定したGALNT6, GnT1, XYLT2はそれぞれO型糖鎖、N型糖鎖、プロテオグリカンの初期において働く酵素である。これらについて上記の解析を行った結果、糖転移酵素のクラスターは糖転移酵素ごとに性質が異なることが示唆された。さらに生化学的な解析によってクラスターの性質を調べる必要がある。
2)生細胞内の糖転移酵素の分布と基質との関係を調べるための実験系の構築を行った。CRSPR-Cas9によって糖転移酵素とHaloタグの融合タンパク質を発現する細胞を構築した。Haloタグは基質と反応することで生細胞内で蛍光ラベルすることができる。この系を用いて、理化学研究所のSCLIMを使用した生細胞イメージングを行った結果、GALNT6-Haloにおいて生細胞内の分布や動態を3次元において優れた分解能で観察することができた。またGALNT6-HaloとRUSH基質タンパク質の観察もできたため、ノックアウトした細胞におけるGALNT6とRUSH基質タンパク質の相互作用への影響を調べることが可能である。
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