2021 Fiscal Year Annual Research Report
炎症性の難病を制御するプロスタグランジン輸送体の細胞内局在制御機構の解明
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20K22719
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| Research Institution | Takasaki University of Health and Welfare |
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Principal Investigator |
中村 吉伸 高崎健康福祉大学, 薬学部, 助教 (60880317)
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2020-09-11 – 2022-03-31
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| Keywords | SLCO2A1 / N型糖鎖修飾 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究では、プロスタグランジン膜輸送体SLCO2A1の細胞内局在を制御する因子の同定を目的に研究を実施した。これまでの検討により、翻訳後修飾であるN型糖鎖修飾がSLCO2A1の細胞内局在の調節因子の一つであることを示唆する結果を得た。具体的には、野生型SLCO2A1発現HEK293細胞においてSLCO2A1のN134、N478、およびN491にN型糖鎖が結合していることを明らかにし、各アスパラギン残基 (N) をグルタミン(Q)に変異させた三重変異体発現HEK293細胞では、SLCO2A1基質である6-carboxyfluoresceinの取込み量が野生型に比べて顕著に低下することを見出した。最終年度は、N型糖鎖がSLCO2A1の輸送機能や細胞内局在に及ぼす影響をより詳細に検討した。糖鎖修飾酵素阻害薬であるtunicamycinの処置により、野生型SLCO2A1発現HEK293細胞においてSLCO2A1の分子サイズの低下と同時にPGE2取込み活性の低下が観察された。これと一致して、三重変異体では野生型に比べてPGE2取込み最大速度が顕著に抑制され、一方でPGE2に対する親和性はほとんど変化しないことを見出した。三重変異および野生型SLCO2A1の細胞全体におけるタンパク質発現量に有意な差は無かったが、細胞膜画分における発現量は野生型に比べ三重変異体で約20%近くまで減少していた。また、N型糖鎖修飾はHEK293だけでなく、ヒト肝癌由来HepG2、およびヒト肺胞基底上皮腺癌由来A549細胞等にSLCO2A1を強制発現させた際にも観察された。以上の結果より、N型糖鎖はSLCO2A1の細胞内局在制御因子の一つであることが示された。
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