2022 Fiscal Year Annual Research Report
癌モデルザルの作製とiPS細胞由来の再生T細胞を用いた新規癌免疫療法の開発
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20K22840
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| Research Institution | Shiga University of Medical Science |
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Principal Investigator |
近藤 健太 滋賀医科大学, 医学部, 助教 (60779974)
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| Project Period (FY) |
2020-09-11 – 2023-03-31
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| Keywords | カニクイザル / がんモデルサル / 再生T細胞 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
申請者らは、レンチウイルスを用いて4つの癌関連遺伝子をカニクイザルの卵に遺伝子導入させた後、MHCホモサル由来の精子を用いて顕微授精を行い、遺伝子導入された胚を仮親へ移植することでTgカニクイザルの作出を試みている。レンチウイルスを用いて作出したTgカニクイザルを解析したところ、ゲノムDNAに4つの癌関連遺伝子が挿入されていた。このTgカニクイザルは、マーカー遺伝子としてGFPとクラビラオレンジ (KO)を導入しているため発現を確認すると、GFPの発現は確認できたが、クラビラオレンジ (KO)は発現していなかった。クラビラオレンジ (KO)が発現していない理由として、挿入されたトランスジーンのコピー数が少ないことが考えられた。
そこで2022年度は、そこでトランスジーンのコピー数を増やすため受精卵に遺伝子導入する方法の改善を試みた。ウイルスを用いずにTransposaseにより積極的にゲノムDNAへ遺伝子を挿入できるpiggyBac Transposon ベクターを構築した。作製したpiggyBac Transposon ベクターをサルの受精卵に導入すると蛍光タンパク質を発現した。したがって、piggyBac Transposon ベクターは効率的に遺伝子改変サルを作出できることが期待できる。
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