Effect of neutrophil extracellular traps on tumor infiltrating lymphocytes in gastrointestinal tumor

2021 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 20K22960
• Research Institution: Jichi Medical University
• Principal Investigator: 金丸 理人 自治医科大学, 医学部, 助教 (10625544)
• Project Period (FY): 2020-09-11 – 2022-03-31
• Keywords: 好中球細胞外トラップ / 腫瘍浸潤リンパ球 / 消化器癌 / 細胞障害性T細胞 / CXCL-11 / 腹膜播種

Outline of Annual Research Achievements

1.健常人末梢血から好中球と単核細胞（PBMC）を採取、好中球をPMA（1microM）またはLPS（10microg/ ml）で15分間刺激し、十分に洗浄し、さらに4時間インキュベートしNETsを作成、PBMCは抗ＣＤ３抗体でコーティングプレート上でr-IL-2(10ng/ml)を含む培養液にて7-14日間培養し、活性化T細胞を得た。このT細胞を3ミクロンのporeを有するインサートに静置し、下層にCXCL-11（1000ng / ml）を含んだ培養液を添加、2時間後に下層に遊走した細胞数を検討したところ、T細胞の遊走はPMA活性化好中球の存在下で劇的に減少し、DNase IによるNETsの分解や、遠心分離によってNETs成分を除去しても変化はなかったが、カタラーゼ（800u / ml）で前処理するとキャンセルされた。また、活性化T細胞のplastic plate上のrandom migrationをタイムラプス動画で観察すると、PMA刺激好中球の上清の添加で劇的に抑制された。また、活性化T細胞の遊走はLPS活性化好中球によって有意に阻害されたが、NETsを除去するとその抑制は部分的に解除された。

2.Western blot法にてCXCL-11はLPS刺激好中球に由来するNETsによって完全に分解されたが、DNAseIやプロテアーゼ阻害剤であるPMSFの共存でその抑制は解除阻害された。

3.In vivoでのNETsの効果を検討するために、C57/BL6マウスに同種胃癌細胞YTN16を腹腔内投与し腹膜播種を形成させる実験系を作成し、抗PD-1抗体に投与が有効であることを確認した。また、活性化好中球由来のNETsを共投与すると腹膜播種の形成が促進されることが判明した。

Research Products

• [Presentation] 活性化好中球は活性化T細胞の遊走能を抑制する (2021)
  • Author(s): 田村 昂平, 金子 勇貴, 風當 ゆりえ, 髙橋 和也, 木村 有希, 齋藤 晶, 東條 峰之, 金丸 理人, 佐田友 藍, 宮戸 秀世, 大澤 英之, 嵯峨 泰, 竹井 裕二, 藤原 寛行，北山 丈二
  • Organizer: 第80回日本癌学会学術集会
• [Presentation] PMA刺激好中球が癌細胞の遊走能に与える影響 (2021)
  • Author(s): 髙橋 和也, 大澤 英之, 金子 勇貴, 田村 昂平, 木村 有希, 齋藤 晶, 東條 峰之, 金子 理人, 佐田友 藍, 宮戸 秀世, 佐田 尚宏，北山 丈二
  • Organizer: 第80回日本癌学会学術集会