2020 Fiscal Year Research-status Report
マクロファージを介した椎間板内神経成長因子誘導機構の解明と腰痛との関連性の検討
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20K22984
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| Research Institution | Kitasato University |
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Principal Investigator |
中脇 充章 北里大学, 医学部, 助教 (00623175)
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| Project Period (FY) |
2020-09-11 – 2022-03-31
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| Keywords | マクロファージ / 神経成長因子 / 椎間板 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
申請者はこれまにで椎間板傷害後に神経成長因子（NGF)の発現が上昇すること、in vitroにおいてTNF-alpha, TGF-betaが椎間板細胞におけるNGFの発現を亢進させることを明らかにしてきた。本年度はNGF産生機構へのマクロファージの関与を検討するために、傷害椎間板におけるマクロファージを分離し、NGFおよびその制御因子の発現を検討した。C57BL/6Jに対し27G針を用いて椎間板傷害モデルを作製した。傷害後7日目にTnfa, Tgfb, Ngfの発現が上昇が認められたため、傷害後7日の椎間板を検討に用いた。0.2%コラゲナーゼで18時間37℃で酵素処理し、有核細胞を得た。抗CD11b抗体と磁気ビーズを用いてCD11b陽性（マクロファージ）分画とCD11b陰性（椎間板細胞）分画に分離した。RNAを抽出後、cDNA増幅試薬を用いて増幅後、両分画におけるマクロファージマーカー（F4/80, Cd11b）、Tgfb, Ngfの発現をreal time PCRを用いて検討した。CD11ｂ陽性分画におけるマクロファージマーカー（F4/80, Cd11b）の発現はCD11ｂ陰性分画に比して有意に高かった。Tnfaの発現はCD11b陽性分画で有意に高かった。Tgfbの発現はCD11b陰性分画で有意に高かった。Ngfの発現に有意な差は認められなかった。本研究結果から、マクロファージは炎症性サイトカイン産生を介したオートクリン、パラクリン作用によりNGFを制御している可能性が示唆された。マクロファージはNGFを介した腰痛機構に重要な役割を果たしているかもしれない。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
マクロファージの役割の一端を明らかにしており、おおむね順調に進展していると考えられる。
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| Strategy for Future Research Activity |
TNF-alphaノックアウトマウスおよびマクロファージ除去剤を用いてマクロファージを介したNGF誘導機構の詳細を明らかにする予定である。
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| Causes of Carryover |
COVID-19の蔓延により選択的手術が延期または中止を強いられた。そのため、ヒト椎間板細胞の採取とそれらを用いた解析に遅れが生じた。来年度、ヒト検体の解析費用に用いる予定である。
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[Journal Article] Role of CD14-positive cells in inflammatory cytokine and pain-related molecule expression in human degenerated intervertebral discs2021
Author(s)
Miyagi M, Uchida K, Takano S, Nakawaki M, Sekiguchi H, Nakazawa T, Imura T, Saito W, Shirasawa E, Kawakubo A, Akazawa T, Inoue G, Takaso M
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Journal Title
J Orthop Res
Volume: -
Pages: -
DOI
Peer Reviewed
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