2022 Fiscal Year Annual Research Report
口腔がん細胞におけるプロスタグランディンE2受容体EP4の役割解明
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20K23061
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| Research Institution | Yokohama City University |
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Principal Investigator |
大澤 昂平 横浜市立大学, 医学研究科, 客員研究員 (50879715)
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| Project Period (FY) |
2020-09-11 – 2023-03-31
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| Keywords | 口腔がん / 遊走 / EP4 / カルシウム / Orai1 / CAMKK2 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究では、申請者が先行研究で発見したがん細胞の増悪に関与すると考えられるEP4-Orai1-Ca2+シグナルの下流の経路を明確にし、その分子メカニズムを明らかにすることを目的としている。これにより、直接細胞遊走を制御するシグナル因子の同定を目指し、さらに特定したシグナル因子に対する阻害剤を同定し、その細胞遊走抑制効果を検証する。
(2020年度)口腔がん細胞におけるEP4刺激時の発現蛋白質の同定と評価：がん増悪の関与が疑われるCAMKK2(Calcium/Calmodulin dependent protein kinase kinase 2)、AMPK(AMP活性化プロテインキナーゼ)をはじめとした蛋白質をウエスタンブロット法を用いてEP4刺激時の発現の変化を解析し、EP4-Orai1-Ca2+シグナルへの関与する分子を同定する。同定された分子についてそれぞれの阻害薬を使用し、分子間同士の位置関係を整理し、シグナルを同定する。ヒト由来口腔がん細胞HSC-3を用い、実験を行ったところ、EP4刺激時にCAMKK2、AMPKが有意にリン酸化した。また、この事象は口腔がん細胞(HSC-3)以外にも神経膠芽腫細胞でも確認できた。
(2021年度)同定した分子に対する阻害薬の細胞遊走能、増殖能への効果判定：1年目で同定したシグナルの阻害薬を使用し、EP4アゴニストによって亢進した細胞遊走能を抑制できるか検討する。遊走能はスクラッチアッセイを用いて評価する。ヒト由来口腔がん細胞HSC-3を用い、実験を行ったところ、CAMKK2阻害薬はEP4刺激によって亢進した遊走能を抑制した。
(2022年度)EP4-Orai1-Ca2+シグナルによってミトコンドリア生合成、細胞遊走への関与が報告されている葉状仮足の発現が亢進した。
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