2020 Fiscal Year Research-status Report
Effect of glutamine metabolism on the anti-tumor effects of aspirin
Project/Area Number |
20K23179
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Research Institution | Kansai Medical University |
Principal Investigator |
朴 将源 関西医科大学, 医学部, 助教 (30755616)
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Project Period (FY) |
2020-09-11 – 2022-03-31
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Keywords | アスピリン / PIK3CA / 大腸癌 / グルタミン代謝 |
Outline of Annual Research Achievements |
PIK3CA変異ならびに野生型大腸癌細胞株を用いて、アスピリン処理およびグルタミン枯渇による細胞周期への影響を、フローサイトメトリーを用いて解析を行った。PIK3CA変異株であるHCT-15およびHCT116細胞においてはアスピリン処理ならびグルタミン枯渇によりG1期停止を認めた一方で、PIK3CA野生型であるSW480細胞においては明らかな細胞周期への影響を認めなかった。 続いて、HCT-15細胞に対しアスピリン処理を行った上で網羅的解析を網羅的遺伝子発現解析(RNA-seq)を実施したところ、アミノ酸トランスポーターに関連する遺伝子群がエンリッチされた。さらに、ウエスタンブロッティングによりタンパク発現を確認したところ、グルタミナーゼなどのグルタミン代謝関連酵素がアスピリン処理により誘導されることを確認した。 また、アスピリン処理により誘導されたグルタミン代謝関連遺伝子群に対しプロモーター解析を行ったところ、アスピリン処理ならびにグルタミン枯渇により、mRNAレベルならびにタンパクレベルにおいて、Activating Transcription Factor 4 (ATF4)が誘導されることを確認した。 本結果をもとに、グルタミナーゼ阻害剤(CB-839)、アミノ基転移酵素阻害剤(aminooxyacetate)、アミノ酸トランスポーター阻害剤(サラゾスルファピリジン)などを用いて培養癌細胞のグルタミン代謝を修飾し、アスピリンの細胞増殖抑制効果に及ぼす影響をCell Counting Kit-8 およびコロニー形成能試験により確認したところ、アスピリンとの併用により増殖抑制効果が増進されることを確認した。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
比較的マネジメントが容易であるHCT-15細胞、HCT116細胞、SW480細胞を用いて、PIK3CA変異癌細胞におけるグルタミン代謝への依存性を明らかにすることができた。
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Strategy for Future Research Activity |
PIK3CA isogenic cell line であるSW48細胞(PIK3CA H1047R/wt)を用いて、上記の現象がPIK3CA変異特異的であるかを検証していく予定である。既に、PIK3CA変異細胞のRNA-seq解析は終了しており、令和3年度においてPIK3CA野生型細胞の解析を追加し比較する予定である。
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Causes of Carryover |
効率よく試薬購入を実施するために、端数分の繰り越しが妥当であると判断した。PI3K阻害剤であるCopanlisib (BAY 80-6946) 10mg 63400円の購入に充てる。
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Research Products
(3 results)