2021 Fiscal Year Research-status Report
Investigation on Molecular Mechanisms of Liver Diseases Caused by Hepatitis B and D Viruses Coinfection
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20KK0178
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| Research Institution | Kanazawa University |
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Principal Investigator |
島上 哲朗 金沢大学, 附属病院, 特任教授 (50436820)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
村居 和寿 金沢大学, 保健学系, 助教 (10828099)
善岡 克次 金沢大学, がん進展制御研究所, 教授 (60200937)
山下 太郎 金沢大学, 附属病院, 准教授 (90377432)
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| Project Period (FY) |
2020-10-27 – 2024-03-31
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| Keywords | D型肝炎ウイルス / B型肝炎ウイルス / 肝硬変 / 肝がん |
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| Outline of Annual Research Achievements |
1.レポーター遺伝子HiBiTを利用したリコンビナントD型肝炎ウイルス（以下HDV）の作成と抗ウイルス薬スクリニーニング：昨年度まで作成したHiBiTを挿入したリコンビナントD型肝炎ウイルスは、肝がん細胞株内で複製するものの、複製は一過性で、長期間の持続複製が困難だった。さらに、感染性粒子の形成に必須なB型肝炎ウイルス（以下HBV）のエンベロープ蛋白質の存在下でもリコンビナントHDV感染性粒子は産生されなかった。これらの問題点を改善するために、これまでは1倍長のHiBiT-HDV遺伝子やゲノム鎖を利用してリコンビナントHDVを作成していたが、3倍長のHiBiT-HDV遺伝子やアンチゲノム鎖を用いたリコンビナントHDVの作成に着手した。
2.モンゴルにおけるヒト肝がん組織由来RNAのRNAseq解析：これまでのモンゴルとの共同研究から、HDVとB型肝炎ウイルス（以下HBV）が共感染者の肝がん組織由来RNA、HBV単独感染者の肝がん組織由来RNAを計約50例分、すでに金沢大学へ送付を受けている。これらのRNAに関してRNAseq解析を行い、HDVとHBV共感染者の肝がん組織特異的に、複数の融合遺伝子を同定した。
3.モンゴルにおけるヒト肝がん組織と血液の採取：モンゴルの共同研究者（モンゴル国立医科大学のDuger教授）は、モンゴルにおいて肝がんに対して手術療法を受けた患者の肝組織の残余検体からRNAを抽出し、保存している。また肝がんの手術療法をうけた患者の血液を保存すると共に、肝画像所見、腫瘍マーカーを含む血液生化学データや臨床情報の収集、予後の追跡を行っている。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
これまで、HiBiTを利用したリコンビナントHDVの作成やこの系を用いたHDVに対する抗ウイルス薬のスクリーニング、およびモンゴルのヒト肝がん組織のRNAを用いたRNAseq法による網羅的遺伝子解析を行うなど概ね順調に進行している。本来であれば、研究代表者がモンゴルを訪問し、モンゴルにおいてヒト肝組織からのRNA抽出法をモンゴルの共同研究者と共に実施する予定であった。しかし、新型コロナウイルスの感染蔓延によりモンゴル訪問は困難であったため、RNA抽出法の共有により代替した。現時点では、モンゴルにおいても純度の高いRNAの抽出ができている。モンゴルでは、今年度も遺伝子解析用に肝がん患者の肝組織由来RNAを収集しているが、新型コロナウイルスの感染蔓延により、日本への輸送が困難であった。そのため、今年度は、モンゴルからのRNAの供与は受けられなかった。また、研究代表者のモンゴル訪問により、モンゴルにおいてHBV・HDVの培養肝細胞感染系を用いた研究基盤の確立を行う予定であった。しかし、モンゴル訪問ができていないためこの目的は未達成である。
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| Strategy for Future Research Activity |
1.レポーター遺伝子HiBiTを利用したリコンビナントHDVの改良：3倍長のHiBiT-HDV遺伝子やアンチゲノム鎖を利用することで、長期間持続複製が可能で、さらに感染性粒子を産生できるリコンビナントHDVを作成する。また、これまでは、肝がん細胞株だけを利用してきたが、今年度は、Primary Human Hepatocytesも用いてリコンビナントHDVの複製・感染能を解析する。このような方法でHDVの全生活環をHiBiT活性でモニタリングできるようにリコンビナントHDVを改良する。さらに改良したリコンビナントHDVを用いて、FDA承認薬ライブラリーの抗ウイルス効果のスクリーニングを行う。
2.モンゴルにおけるヒト肝がん組織由来RNAのRNAseq解析：これまでの解析から同定した、HDVとHBV共感染者の肝がん組織特異的に、複数の融合遺伝子に関して、それぞれ、培養細胞過剰発現用ベクターにクローニングする。さらにこの融合遺伝子発現ベクターを培養細胞に遺伝子導入し、機能解析を行う。機能解析として、形質転換能、細胞増殖能、コロニー形成能、腫瘍形成能、抗がん剤感受性、血管新生能を評価する。また、今年度、モンゴルから新たにヒト肝がん組織由来RNAの送付を受ける予定である。そのRNAを用いて、これまで同定した融合遺伝子の有無を確認する。
3.モンゴルにおけるヒト肝がん組織と血液の採取：引き続きヒト肝がん組織由来RNAの抽出と保存、血液の保存および臨床データの収集を行う。また新型コロナウイルス感染対策に伴う渡航制限を考慮しつつ、日本、モンゴルの研究者の相互訪問をはかる。
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| Causes of Carryover |
モンゴルへ渡航し、現地で共同研究を行うための旅費を計上していたが、新型コロナウイルスの感染蔓延による渡航制限のため、モンゴルへ渡航できなかったため、未使用額が生じた。今後、渡航制限が緩和されれば、未使用額を利用して、モンゴルへ渡航し、共同研究を実施する予定である。
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Research Products
(1 results)
