2009 Fiscal Year Annual Research Report

生命科学研究推進の為の新たなin vivoイメージングの基盤技術の開発

Research Project

Project/Area Number	21220009
Research Institution	University of Tsukuba
Principal Investigator	高橋智 University of Tsukuba, 大学院・人間総合科学研究科, 教授 (50271896)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	三輪佳宏筑波大学, 大学院・人間総合科学研究科, 講師 (70263845) 一條裕之筑波大学, 大学院・人間総合科学研究科, 准教授 (40272190) 八神健一筑波大学, 大学院・人間総合科学研究科, 教授 (40166476) 杉山文博筑波大学, 大学院・人間総合科学研究科, 准教授 (90226481)
Keywords	in vivoイメージング / 蛍光タンパク質 / 発光タンパク質 / 薬物動態 / 遺伝子改変マウス / 神経科学
Research Abstract	1)蛍光励起によりin vivoで細胞の標識を可能にするマウスの開発 keadeおよびその変異体を発現するマウスを樹立した。フォトコンバージョンにより標識色を変化させられることを確認した。フォトコンバージョンした細胞を追跡するために、内視鏡型の蛍光顕微鏡の条件設定を行った。 2)非標識低分子を蛍光としてモニターできるマウスの開発薬物動態を知る為には、現在は経時的に採血し、血中濃度を測定する方法が一般的であるが、薬物の存在により安定化する蛍光タンパク質(デグラトンプローブ)を用いることにより、薬物の存在を蛍光強度としてモニターすることが可能となる。テトラサイクリン来抗生物質に対するデグラトンプローブを発現するトランスジェニックマウスを作製し、そのマウスにテトラサイクリンを投与したところ、濃度に依存して蛍光が観察された。この方法を用いることにより、薬物等の低分子化合物の動態をモニターできることが明らかとなった。 3)神経細胞活動の履歴を標識し、モニターするマウスの開発神経細胞が興奮すると転写されるzif268/Egr1プロモーターにVenusを連結した遺伝子を作製し、トランスジェニックマウスを作製した。その結果、これらマウスは、神経細胞活動性履歴に依存してVenusの蛍光が観察されることが明らかとなった。これらのマウスのVenusの発現を出生後から観察した結果、脳の特定の神経回路で、左右の蛍光標識に差があることが明らかとなった。この観察は、マウスの神経回路に左右差が存在することを示していると考えられた。この結果を論文として投稿中である。