2010 Fiscal Year Annual Research Report
効率的かつ持続的発現が可能な遺伝子治療用DNAの核内動態制御システムの創製
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21300174
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| Research Institution | Ehime University |
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Principal Investigator |
紙谷 浩之 愛媛大学, 大学院・理工学研究科, 教授 (10204629)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
秋田 英万 北海道大学, 大学院・薬学研究院, 准教授 (80344472)
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| Keywords | 非ウィルスベクター / 外来DNA / 遺伝子治療 / 核内動態 |
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| Research Abstract |
1.ヒストンとの共導入:組換えヒストンH3蛋白質とプラスミドDNA(ルシフェラーゼ遺伝子を含む)の複合体を様々な比率で形成させ、浸透圧法により培養細胞に導入した。その結果、プラスミドDNAに対するヒストンの比率が高くなると発現が低下した。これは、核内における発現効率が低下していることが原因であった。したがって、ヒストンとの共導入は単に混合するだけでは不十分であり、適切に相互作用させる必要性があることが明らかとなった。
2.ヌクレオソーム化DNAの導入:試験管内でプラスミドDNA(ルシフェラーゼ遺伝子を含む)をヒストンH2A、H2B、H3、H4各2分子からなるヒストンコアと結合させ(ヌクレオソーム化)、浸透圧法により培養細胞に導入した。しかし、ルシフェラーゼの発現が観察されなかった。現在、この原因を解明中である。
3.転写因子をリクルートするためのシステム:基本転写因子をリクルートする蛋白質(ヘルペスウイルスVP16など)と配列依存的DNA結合蛋白質(酵母GAL4)の融合蛋白質(activator)の遺伝子を作製しプラスミドに導入した。また、GAL4が結合する配列をルシフェラーゼ遺伝子とactivator遺伝子のプロモーター上流に導入した。ハイドロダイナミクス法によりマウスに導入した結果、正のフィードバック機構によりactivator発現が持続し、ルシフェラーゼの発現も持続した。
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