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2009 Fiscal Year Annual Research Report

電子顕微鏡による複合体IおよびV-ATPaseの構造解析

Research Project

Project/Area Number 21370042
Research InstitutionTokyo Institute of Technology

Principal Investigator

横山 謙  Tokyo Institute of Technology, 資源化学研究所, 特別研究員 (70271377)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 光岡 薫  産業技術総合研究所, バイオメディシナル情報センター, 研究チーム長 (60301230)
KeywordsATP / 呼吸 / 構造 / 活性酸素 / 電子顕微鏡
Research Abstract

V-ATPaseのヒスタグ精製系作成時に用いた相同組み替えにより、親水性のサブユニットIのN末にヒスタグを導入した組み替え体株を作成し、Ni-NTAを利用したアフィニティー精製ができた。ホロV-ATPaseの2次元結晶は作成されており、並びのよい領域を傾斜してクライオ電子顕微鏡像をとり、部部的ながら3次元像を再構成できた。電子線トモグラフィーといわれる手法である。この手法により、分子中心付近の構造の概要が明らかになり、外周固定子が3本ある可能性が示唆された。外周固定子の数を確定するために、外周固定子を構成するEおよびIサブユニットに対する抗体を作成し、それぞれのサブユニット数の確定を試みている。特異的抗体の作成は完了した。
複合体Iのホロ酵素精製系の構築を行うために、精製条件の検討を行ったが、ホロ酵素が得られる条件は確定できなかった。可溶化状態ではある程度ホロ酵素が含まれていることが阻害剤の感受性から予想できるが、Ni-NTAカラムをかけると解離が起こることがわかった。界面活性剤や、pH,温度、脂質の添加等の条件検討をさらに進めて、解離が起こらない条件を確定する必要がある。

  • Research Products

    (3 results)

All 2009

All Journal Article (3 results) (of which Peer Reviewed: 3 results)

  • [Journal Article] Crystal structure of A3B3 complex of V-ATPase from Thermus thermophilus.2009

    • Author(s)
      Maher MJ, Akimoto S, Iwata M, Nagata K, Hori Y, Yoshida M, Yokoyama S, Iwata S, Yokoyama K.
    • Journal Title

      EMBO J Vol 28

      Pages: 3771-3779

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Cryo-EM structure of the native GroEL-GroES complex from thermus thermophilus encapsulating substrate inside the cavity.2009

    • Author(s)
      Kanno R, Koike-Takeshita A, Yokoyama K, Taguchi H, Mitsuoka K.
    • Journal Title

      Structure Vol 28

      Pages: 287-293

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Mechanism of inhibition of Tributyltin chloride of the V type Molecular Motor.2009

    • Author(s)
      Takeda M, Ikeda C, Shimabukuro K, Yoshida M, Yokoyama K.
    • Journal Title

      Biophysical J Vol 96

      Pages: 1210-1217

    • Peer Reviewed

URL: 

Published: 2011-06-16   Modified: 2016-04-21  

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