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2011 Fiscal Year Annual Research Report

腫瘍ムチンとしてのエピグリカニン/Muc21の免疫抑制能の解析

Research Project

Project/Area Number 21390018
Research InstitutionThe University of Tokyo

Principal Investigator

入村 達郎  東京大学, 大学院・薬学系研究科, 教授 (80092146)

Keywordsムチン / レクチン / グリコフォーム / モノクローナル抗体 / 免疫抑制 / 胸腺上皮 / アポトーシス / 樹状細胞
Research Abstract

本研究は膜型ムチンであるMuc21の癌細胞の挙動、特に報告されている免疫抑制能との関連を明らかにすることを目的としている。リコンビナント分子のin vivoでの免疫修飾効果、細胞表面に発現した際の癌細胞の挙動への影響、発現細胞と免疫細胞との相互作用における機能、胸腺上皮細胞に発現したMuc21の成熟及び未成熟T細胞への影響などを解析することを予定した。本年度は、Muc21グリコフォームに特異的なモノクローナル抗体の取得とそれらの特性解析、モノクローナル抗体を用いた胸腺における発現解析、発現細胞の挙動、特にアポトーシス耐性の解析、及びグリコフォームの異なるリコンビナントMuc21の産生とその構造の解析を目的とした。
T抗原を持つMuc21に特異的なモノクローナル抗体に続いて、シアル酸を含む糖鎖を持つMuc21に特異的なモノクローナル抗体の取得を目指してスクリーニングを行い、複数のハイブリドーマを得た。また、これと並行してノックアウトマウスの解析を行い、二回目の試みとなる今回のアプローチで、C57BL/6を背景とするノックアウトマウスが作出されたことを示した。Muc21を発現した癌細胞のin vitroにおける挙動解析は、糖鎖生合成経路に変異のあるCHO細胞や種の異なる細胞にMuc21を発現させることにより、抗接着性だけでなくアポトーシス耐性に関しても、分子ドメインの重要性の確認、グリコフォームの重要性の検証に成功した。要約すれば、後者においてアポソーシス耐性がシアル酸を含む糖鎖を細胞外ドメインに持つことが必須であることが解った。Muc21ベクターをこれらの細胞から細胞外に放出されるようにデザインして発現させ、その産物の精製法を確立した。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

おおむね順調に進展しているが、当初作出した転写開始部位ノックアウトマウスは遺伝子発現が残っていることが明らかになり、二回目の遺伝子全長ノックアウトマウスの作出を行ったため、プロジェクト全体の進め方に影響が出た。また、モノクローナル抗体の使用により、胸腺上皮細胞においてmRNAレベルは高いが、Muc21の発現レベルは低いことが判明しつつあり、この点でも軌道修正が必要になると思われる。

Strategy for Future Research Activity

今後の方向性は主に二つあり、第一はMuc21発現細胞がアポトーシス耐性を獲得するメカニズム、特にそれがグリコフォーム依存的である原因の解明である。第二の点は、グリコフォームを異にするリコンビナントMuc21を精製し、グリコフォー。ムを決定した上で、それらの免疫抑制能をin vivoで解析するとともに、樹状細胞との相互作用を解析することによって、免疫抑制の機構を明らかにすることである。

Research Products

(11 results)

All 2013 2012 2011 Other

All Journal Article Presentation Book Remarks

  • [Journal Article] Cytokine secretion from human monocytes potentiated by p-selectin-mediated Cell adhesion.2013

    • Author(s)
      Suzuki J, Hamada E, Shodai T, Kamoshida G, Kudo S, Itoh S, Koike J, Nagata K, Irimura T, Tsuji T.
    • Journal Title

      Int Arch Allergy Immunol.

      Volume: 160(2) Pages: 152-60

    • DOI
      DOI:10.1159/000339857
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Monocyte differentiation induced by co-culture with tumor cells involves RGD-dependent cell adhesion to extracellular matrix.2012

    • Author(s)
      Kamoshida G, Matsuda A, Sekine W, Mizuno H. Oku T, Itoh S, Irimura T, Tsuji T.
    • Journal Title

      Cancer Lett.

      Volume: 315(2)[PubMed-indexed for MEDLIE] Pages: 145-52

    • DOI
      PMID:22104730
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Local effects of regulatory T cells in MUC1 transgenic mice potentiate growth of MUC1 expressing tumor cells in vivo.2012

    • Author(s)
      Sugiura D, Denda-Nagai K, Takashima M, Murakami R, Nagai S, Takeda K, Irimura T.
    • Journal Title

      PLoS One.

      Volume: 7(9) Pages: e44770

    • DOI
      DOI:10.1371
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Mucin 21 in esophageal squamous epithelia and carcinomas: analysis with glycoform-specific monoclonal antibodies.2012

    • Author(s)
      Tian Y, Denda-Nagai K, Kamata-Sakurai M, Nakamori S, Tsukui T, Itoh Y, Okada K,Yi Y, Irimura T.
    • Journal Title

      Glycobiology

      Volume: 22(9) Pages: 1218-26

    • DOI
      DOI:10.1093/glycob/cws082
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Targeting of macrophage galactose-type C-type lectin (MGL) induces DC signaling and activation.2012

    • Author(s)
      Napoletano C, Zizzari IG, Rughetti A, Rahimi H, Irimura T, Clausen H, Wandall HH, Belleudi F, Bellati F, Pierelli L, Frati L, Nuti M.
    • Journal Title

      Eur J Immunol.

      Volume: 42(4) Pages: 936-45

    • DOI
      DOI:10.1002/eji.201142086
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Cell surface expression of hyaluronan on human ovarian cancer cells inversely correlates with their adhesion to peritoneal mesothelial cells.2012

    • Author(s)
      Tamada Y, Takeuchi H, Suzuki N, Aoki D, Irimura T.
    • Journal Title

      Tumour Biol.

      Volume: 33(4) Pages: 1215-22

    • DOI
      DOI:10.1007/s13277-012-0369-4
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Early activation and interferon-r production of tumor-infiltrating mature CD27 high natural killer cells.2011

    • Author(s)
      Hayakawa Y, Sato-Matsushita M. Takeda K, Iwakura Y, Tahara H, Irimura T.
    • Journal Title

      Cancer Sci.

      Volume: 102(11)[PubMed-indexed for MEDLINE] Pages: 1967-71

    • DOI
      PMID:21781225
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Asialoglycoprotein receptor promotes cancer metastasis by activating the EGFR-ERK pathway.2011

    • Author(s)
      Ueno S, Mojic M, Ohashi Y, Higashi N, Hayakawa Y, Irimura T.
    • Journal Title

      Cancer Res.

      Volume: 71(20)[PubMed-indexed for MEDLIE]Free Article Pages: 6419-6427

    • DOI
      PMID:21868757
    • Peer Reviewed
  • [Presentation] Esophageal squamous carcinoma and normal squamous epithelia express differen tially glycosylated mucin 21.2012

    • Author(s)
      Tian Yuan
    • Organizer
      14^<th> International Biennial Conference on Metastasis Research 2012
    • Place of Presentation
      Brisbane Covention and Exhibition Centre, Australia
    • Year and Date
      2012-09-03
  • [Book] ストライヤー生化学 第7版2013

    • Author(s)
      入村達郎、岡山博人、清水孝雄監訳
    • Total Pages
      1104
    • Publisher
      東京化学同人
  • [Remarks]

    • URL
      http://www.f.u-tokyo.ac.jp/~cancer/labpage/index.html

URL: 

Published: 2014-07-16  

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