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2010 Fiscal Year Annual Research Report

神経筋接合分子欠損症におけるmRNA病態研究と治療法開発研究

Research Project

Project/Area Number 21390266
Research InstitutionNagoya University

Principal Investigator

大野 欽司  名古屋大学, 医学系研究科, 教授 (80397455)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 増田 章男  名古屋大学, 医学系研究科, 助教 (10343203)
伊藤 美佳子  名古屋大学, 医学系研究科, 助教 (60444402)
Keywordsアセチルコリン受容体 / スプライシングトランス因子 / hnRNP L / hnRNP LL
Research Abstract

研究代表者は先天性筋無力症候群においてアセチルコリン受容体αサブユニット遺伝子CHRNA1においてsplicing変異を同定してきた。変異はexon P3Aの23番目の塩基をGからAに変異をさせる。本研究ではこの23G>Aの部位に結合をするsplicing trans-factorの同定を行なった。UV crosslinking後のSDS-PAGE、及び、RNA affinity purificationにて結合タンパクの分子量を推定し、hnRNP Lを候補分子としてWestern blottingにより確認をした。同時に23G>A変異はhnRNP LLの結合能を獲得することを同定した。人工的に塩基配列を置換することにより23G>A変異はhnRNP Lとの結合能を保持するにも関わらず新たにhnRNP LL結合能を獲得するためにhnRNP LとhnRNP LLの競合によりhnRNP Lが結合できなくなることを実証した。さらにhnRNP LとhnRNP LLのノックダウンならびに抗体によるこれら因子の吸着実験によりhnRNP Lはexon P3Aのスキッピングを誘導し、hnRNP LLはexon P3Aの認識を誘導することを実証した。さらにMS2-coat proteinとhnRNP L/hnRNP LLのフュージョン遺伝子を作成することによりこれらの因子は23G>Aの部位に特異的に作用することを明らかにした。さらにhnRNP LとhnRNP LLの各種ドメイン欠失変異を導入することにhnRNP Lにのみ存在するproline-rich regionがhnRNP Lによるexon P3Aスキッピングに関与することを証明した。

  • Research Products

    (2 results)

All 2010

All Presentation (2 results)

  • [Presentation] Mutations at the C-terminal domain (CTD) of collagen Q (ColQ) causing acetylcholinesterase (AChE) deficiency prevent anchoring of ColQ to the neuromuscular junction (NMJ)2010

    • Author(s)
      Sugiyama A, Ito M, Nakata T, Azuma Y, Masuda A, Okumura A, Komaki H, Ohno K
    • Organizer
      40th Annual Meeting, Society for Neuroscience
    • Place of Presentation
      San Diego, USA
    • Year and Date
      20101113-20101117
  • [Presentation] rAAV8-Mediated Protein-Anchoring Therapy for Targeting Collagen Q-Tailed Acetylcholinesterase to the Neuromuscular Junction2010

    • Author(s)
      Ito M, Suzuki Y, Okada T, Fukudome T, Yoshimura T, Masuda A, Takeda S, Krejci E, Ohno K
    • Organizer
      American Society of Gene & Cell Therapy 13th Annual Meeting
    • Place of Presentation
      Washington DC, USA
    • Year and Date
      20100517-20100522

URL: 

Published: 2013-06-26  

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