2011 Fiscal Year Annual Research Report
疾患特異的iPS細胞を用いた難治性小児骨髄異形成症候群の発症機構の解析
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21390308
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| Research Institution | Shinshu University |
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Principal Investigator |
小池 健一 信州大学, 医学部, 教授 (40143979)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
塩原 正明 信州大学, 医学部附属病院, 特任研究員 (00293514)
坂下 一夫 信州大学, 医学部附属病院, 助教 (10345746)
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| Keywords | 骨髄異形成症候群 / iPS細胞 / 白血病性幹細胞 / JMML |
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| Research Abstract |
細胞核の中に入らず、細胞質内で自らのゲノムを複製して大量のタンパク質を作り出すセンダイウイルスベクターを用いて、PTPN11遺伝子変異を有するJMML患者のcultured CD34陽性細胞にOCT3/4、SOX2、c-MYC、KLF4、green fluorescent protein (GFP)をtransfectionした。放射線照射マウス胎児線維芽細胞をfeeder細胞として、20%knockout serum replacementとbasic fibloblast growth factorを含むhuman ES mediumで培養したところ、CD34陰性でPTPN11遺伝子変異陽性の細胞集塊が多数形成された。これらの細胞はOCT3、NANOGのCpG部位がほとんどunmethylatedであった。ES細胞に特徴的な分子とされるNANOG、GDF3、DPPA4の発現が認められた。また、明らかなテロメラーゼ活性を示したことから、iPS細胞にcompatibleと考えられた。AGM-S3細胞上で、day 0-4まではBMP4、day 4-6はSCF、VEGF内で培養し、day 6以降はSCF、TPO、GM-CSFで培養した。Day 20に産生された培養細胞をflow cytometryで解析したところ、80%以上の細胞がCD45陽性で、一部の細胞は骨髄系抗原であるCD33を発現していた。現在、症例数を増やしてより多くの骨髄系細胞の増殖分化が可能な培養条件について実験を進めている。iPS細胞からCD34陽性細胞をより多く得るための培養システムの開発も同時に進めた。9例のJMML (PTPN11,5例;RAS,4例)の末梢血を用いて、CD34^+細胞を分離後、SCF+TPOを含むAGM-S3マウスストローマ細胞と共培養を行った。全例においてCD34^+細胞が増殖し、14日目における増幅率は22.5±9.9倍であった。増幅されたCD34^+細胞の90%以上はCD38陰性であり、GM-CSFreceptorおよびc-kitが陽性であった。このday 14 CD34^+CD38^-細胞は冷凍保存が可能であった。これらの結果は今までに無い画期的な成果であった。現在、NOGマウスの移植実験を行なっている。
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[Journal Article] Long-term haematological improvement after non-intensive or no chemotherapy in juvenile myelomonocytic leukaemia and poor correlation with adult myelodysplasia spliceosome-related mutations2012
Author(s)
Matsuda K, Yoshida N, Miura S, Nakazawa Y, Sakashita K, Hyakuna N, Saito M, Kato F, Ogawa A, Watanabe A, Sotomatsu M, Kobayashi C, Ito T, Ishida F, Manabe A, Kojima S, Koike K
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Journal Title
Br J Haematol
Volume: 157
Pages: 647-50
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Autoimmune lymphoproliferative syndrome-like disease with somatic KRAS mutation2011
Author(s)
Takagi M, Shinoda K, Piao J, Mitsuiki N, Takagi M, Matsuda K, Muramatsu H, Doisaki S, Nagasawa M, Morio T, Kasahara Y, Koike K, Kojima S, Takao A, Mizutani
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Journal Title
Blood
Volume: 117
Pages: 2887-90
Peer Reviewed
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[Journal Article] Engraftment syndrome, but not acute graft-versus-host disease, younger age, CYP3A5 or MDR1 polymorphisms, increases tacrolimus clearance in pediatric hematopoietic stem cell transplantation2011
Author(s)
Yanagisawa R, Katsuyama Y, Shigemura T, Saito S, Tanaka M, Nakazawa Y, Sakashita K, Shiohara M, Koike K
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Journal Title
Bone Marrow Transplantation
Volume: 46
Pages: 90-97
Peer Reviewed
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