2010 Fiscal Year Annual Research Report
独自のプロテオーム解析を用いた癌組織由来の微量血中腫瘍マーカーの同定と定量評価
| Project/Area Number |
21390354
|
|---|
| Research Institution | 独立行政法人医薬基盤研究所 |
|---|
Principal Investigator |
朝長 毅 独立行政法人医薬基盤研究所, 創薬基盤研究部プロテオームリサーチプロジェクト, プロジェクトリーダ (80227644)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
松原 久裕 千葉大学, 大学院・医学研究院, 教授 (20282486)
野村 文夫 千葉大学, 大学院・医学研究院, 教授 (80164739)
西村 基 千葉大学, 大学院・医学研究院, 助教 (80400969)
|
|---|
| Keywords | プロテナーム / ペプチド / 癌 / 腫瘍マーカー / 診断 |
|---|
| Research Abstract |
近年、プロテオーム解析を用いた血中の癌の早期診断マーカー探索が数多くなされているがいまだに臨床応用に至った例はない。その主な原因として、血液や尿中に存在する真に有用な腫瘍マーカーが非常に微量で、通常の網羅的解析ではそれらを検出することが困難であるからだと思われる。そこで本研究では、癌組織に特異的に発現するタンパク質にターゲットを絞り、血中に分泌あるいは漏出する微量な腫瘍マーカー候補タンパク質・ペプチドをSRM/MRM法を用いて、検出・定量することを目的とする。
平成22年度は21年度に引き続き、最新のプロテオーム解析技術を駆使して、種々の癌組織、特に大腸癌と乳癌組織中で癌特異的に発現増大するリン酸化タンパク質、膜タンパク質の探索を行った。その結果、癌の診断マーカーとなりうるいくつかのタンパク質を同定した。これらのタンパク質について、ウエスタンブロットや免疫染色を行い、確かに癌組織で発現増大していることを確認した。また、1000例以上の種々の癌組織からなる組織アレイを用いて、目的のタンパク質が大腸癌や乳癌に特異的に高発現していることも確かめた。それらのマーカー候補タンパク質を血液中で定量するために、質量分析計を用いたSRM/MRM法の開発を行った。目的タンパク質のトリプシン消化ペプチドの中からSRM/MRM法に最適なペプチドを選び、その合成ペプチドを用いて、条件検討をおこなった。また、そのペプチドの安定同位体標識ペプチドを内部標準としてサンプルに加えることで、目的のペプチドの絶対定量が可能となった。今後はSRM/MRM法を用いて、上記の目的タンパク質を培養細胞上清中及び患者血液中で検出・定量が可能かどうか検討する。それが可能になれば、種々の癌の早期発見・病態診断が可能になると思われる。
|
