2010 Fiscal Year Annual Research Report
難聴症例のミトコンドリア遺伝子変異の網羅的解析法確立と内耳細胞内の変異定量解析
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21390459
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| Research Institution | Tokyo Medical and Dental University |
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Principal Investigator |
喜多村 健 東京医科歯科大学, 大学院・医歯学総合研究科, 教授 (90010470)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
野口 佳裕 東京医科歯科大学, 医学部附属病院, 講師 (50282752)
伊藤 卓 東京医科歯科大学, 医学部附属病院, 助教 (40401400)
加藤 智史 東京都健康長寿医療センター, 研究所, 研究員 (80469965)
木村 百合香 東京都健康長寿医療センター, 研究所, 研究員 (40450564)
田中 雅嗣 東京医科歯科大学, 東京都老人総合研究所研究所, 研究部長 (60155166)
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| Keywords | 遺伝子 / 医療福祉 / 脳・神経 / 神経科学 / 臨床 |
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| Research Abstract |
ミトコンドリア遺伝子変異網羅的解析法確立
(1)遺伝性感音難聴症例でゲノムDNAを抽出した373例を対象に、ミトコンドリア遺伝子変異の有無を網羅的に解析した。
(2)用いた手法は、多項目のアッセイを一本のマイクロチューブ内で同時に行う手法で、ビオチン標識ブライマーを用いた28-plex PCRによりミトコンドリアDNAのほぼ全領域を増幅し、次に65種類の変異型または野生型の塩基配列に特異的なオリゴヌクレオチドチューブをハイブリダイズさせ解析する蛍光ビーズ・アレイPCR-Luminex【〇!R】法である。
(3)mtDNA主要29変異(シリーズA)の網羅的な解析では、m.1555A>G変異11人(2.9%)、m.3243A>G変異9人(2.4%)、m.8348A>G、m.11778G>A、m.15498G>A変異を各1人(0.3%)で検出した。m.3243A>G変異の9例については変異率を測定したが、聴力との相関は明らかではなかった。
(4)次に、mtDNA主要32変異(シリーズB)の網羅的解析では、m.7444>A変異とm.7472C>insC変異を各1人(0.3%)に検出した。m.7444G>A変異はレーバー病のsecondary mutationとしての報告があるが、明らかな家族性難聴を認めない42歳の女性で同定され、本人と家族ともに視力障害を認めず、純音聴力検査で両側の高音急墜型感音難聴を示した、m.7472C>insCは進行性ミオクローヌスてんかんの原因として知られているが、両側の中等度の全音域の感音難聴を認める35歳男性で変異が認められ、てんかんや中枢障害などを認めなかった。
(5)本研究で開発されたミトコンドリア遺伝子変異の網羅的解析法は、主要なミトコンドリア遺伝子変異が解析可能であり、遺伝性難聴の原因遺伝子同定に有用であると判明した。
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