2009 Fiscal Year Annual Research Report
多種の血管新生因子を同時検出するための蛍光プローブの創製と医療診断への展開
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21560814
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| Research Institution | National Institute of Advanced Industrial Science and Technology |
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Principal Investigator |
鈴木 祥夫 National Institute of Advanced Industrial Science and Technology, 産学官連携推進部門, 主任研究員 (60321907)
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| Keywords | 血管内皮細胞増殖因子 / 蛍光 / タンパク質 / センサー / 分子プローブ / 色素 |
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| Research Abstract |
本年度は、VEGF検出用蛍光分子プローブ及びFGF検出用分子プローブに導入するための蛍光発色団の設計及び合成を中心に行った。それぞれの蛍光分子プローブの蛍光発色団は、これまでに開発したタンパク質検出用試薬を改良し、標的物質との疎水性相互作用による複合体形成および分子内のICT状態の変化によって強い蛍光発光を誘起する部位として4-(ジシアノメチレン)-2-メチル-4H-ピランを有するものとした。また、4-(ジシアノメチレン)-2-メチル-4H-ピランと、二重結合を介してフェニル基を結合させることによって、共役系を伸長し、励起波長および蛍光波長の長波長化を誘起することができた。さらに、二重結合の数および蛍光発色団中の官能基を電子供与性あるいは電子吸引性に変えることによって、VEGF検出用蛍光分子プローブとFGF検出用分子プローブの互いの励起波長が重ならないようにすることが出来た。さらに開発した蛍光発色団をVEGFとの親和性が確認されているペプチド鎖の末端に導入し、VEGFとの相互作用を蛍光光度法を用いて確認した。その結果、VEGF添加前は弱い蛍光が観察されたが、室温下、VEGFを添加すると、瞬時に蛍光強度の増加が確認された。検量線については、VEGF濃度と蛍光強度との間には良好な直線関係が成立した。また、妨害物質の影響について検討したところ、無機塩、還元剤、有機溶媒などは、分析試薬とVEGFとの反応に影響を与えないことが分かった。
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