2011 Fiscal Year Annual Research Report
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21570002
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| Research Institution | Saitama University |
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Principal Investigator |
松本 幸次 埼玉大学, 理工学研究科, 教授 (00119140)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
原 弘志 埼玉大学, 理工学研究科, 准教授 (00173071)
松岡 聡 埼玉大学, 理工学研究科, 助教 (90509283)
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| Keywords | 脂質ドメイン / カルジオリピン / ホスファチジルグリセロール / 枯草菌 / カルジオリピン合成酵素 / MinD |
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| Research Abstract |
本研究は、細菌膜脂質ドメインの構造とその形成機構の解明を目的とし、以下の2つの課題を設け、その解決をはかることを目的とした。(1)カルジオリピンとホスファチジルエタノールアミンは枯草菌細胞膜に均一に分布せず、分裂隔壁と両極にドメインをつくり局在することを明らかにしたので、これまで未検討であった他の主要脂質に対するプローブを開発し、細胞表層における膜脂質分布の全体像を解明する。(2)枯草菌細胞の分裂隔壁細胞膜に脂質合成酵素が局在することをこれまでに明らかにしたので、分裂隔壁への局在が、どの様な仕組みでおこるのかを、細胞分裂に関連するタンパク質との相互作用と、酵素タンパク質の内部の局在に係わる領域を解析し、脂質ドメインが形成・維持される原理を解明する。
23年度は、課題(1)は、21・22年度に続き標的脂質分子に特異的に結合するオリゴペプチドをM13ファージディスプレイのライブラリーから選択、評価した。糖脂質、ホスファチジルグリセロールもしくはカルジオリピンに結合するペプチドをコードするクローンを得て、配列を決定し、ELISA法で特定脂質に特異性を示す候補クローンを選択した。これらクローンのGFP融合体を構築し、in vivoでの特異性及び局在検定を実施した。糖脂質に対して興味深い特性を示すクローンを得ている。
課題(2)は、細胞分裂位置制御タンパク質MinDのCOOH末端に見出した新たな両親媒性αヘリックスCTDα1の役割について、22年度に続き解析を進めた。この新規な両親媒性ヘリックスは、DivlVA,MinJに依存することなく隔壁に局在し、αヘリクスをとること、塩基性のアミノ酸が、局在に必要であることを変異タンパク質の解析から示唆したが、酸性リン脂質との相互作用をin vitroでより詳細に解析することを目的に、相分離法による新たな解析法の開発に取り組んだ。
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