2011 Fiscal Year Annual Research Report
MCMヘリカーゼを中心とした複製フォーク複合体の分子構築と制御
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21570156
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| Research Institution | 財団法人東京都医学総合研究所 |
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Principal Investigator |
高井 裕子 (ZHIYING You) 財団法人東京都医学総合研究所, ゲノム医科学研究分野, 主任研究員 (90332270)
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| Keywords | DNA複製 / MCMヘリカーゼ / DNA結合 / 複製フォーク / ATP結合活 / プライマーゼ |
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| Research Abstract |
MCMヘリカーゼはDNA複製において中心的な役割を果たし、複製フォークで種々のタンパク質と相互作用しつつ、巨大な複製フォーク複合体を形成し、複製フォークの進行と安定な維持を担っている。DNAプライマーゼは複製フォークにおいてDNAポリメラーゼのプライマーとして使用される短いプライマーの合成を触媒し、DNAの連続的な伸長に必要である。多くの原核生物とウイルス系での研究からヘリカーゼとプライマーゼは直接相互作用し、協同的に複製フォーク複合体の機能を制御することが報告された。しかし、真核生物にはそれに関する情報はほとんどない。我々は精製したマウスMCMとポリメラーゼα-プライマーゼ蛋白質を用いて、グリセロール密度勾配遠心でMCM4-6-7複合体がポリメラーゼα-プライマーゼ複合体と共沈降することを見いだした。また、MCM2～7複合体とDNAプライマーゼ(P48とP58サブユニット)が物理的に相互作用することをpull-downアッセイで示した。またMCM2～7とプライマーゼはDNA非存在下で複合体を形成することを非変性ゲルで確認した。Gel-shiftアッセイでは、MCM4-6-7とプライマーゼは一本鎖DNA上に三者複合体を形成する。また、Mcm4-6-7複合体およびMCM2～7複合体によりプライマーゼ活性が促進された。これらの結果から、真核細胞のMCMヘリカーゼは複製フォークにおいてDNAプライマーゼと相互作用し、その活性を促進する可能性が示唆された。
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Research Products
(2 results)
