2009 Fiscal Year Annual Research Report
発生のロバストネス(頑強性)を支える細胞間相互作用の定量的解析
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21570226
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| Research Institution | Hiroshima University |
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Principal Investigator |
山本 卓 Hiroshima University, 大学院・理学研究科, 教授 (90244102)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
坂本 尚昭 広島大学, 大学院・理学研究科, 准教授 (00332338)
柴田 達夫 広島大学, 大学院・理学研究科, 准教授 (10359888)
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| Keywords | 発生・分化 / 遺伝子 / ゲノム / 発現制御 / ゆらぎ |
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| Research Abstract |
本年度は以下の通り研究を実施した。
1) 2種類のレポーター蛍光遺伝子を用いたゆらぎ解析システムの確立と計測
ウニ胚Tb遺伝子の時空間的な発現制御領域にレポーター遺伝子(CFP遺伝子あるいはYFP遺伝子)を連結した構築を作製し、補正用の蛍光色素と共にウニ胚へ導入した。導入胚においてレポーター蛍光を発する細胞の蛍光を、共焦点レーザー顕微鏡を用いて発生過程を追って複数の胚において定量的に解析した。しかしながら、CFP蛍光が弱く、ウニ胚ではバックグランドの蛍光が高いため定量的な解析が難しいことが明らかになった。現在、レポーター蛍光が強くバックグランドの低いレポーター遺伝子に変更する検討を行っている。また、2種類の異なる遺伝子プロモーターを異なるレポーター遺伝子でモニターし、遺伝子発現のゆらぎと細胞分化の関係を調べる実験を開始した。この方法によって、ネットワーク上流のTb遺伝子に対して下流のSM50遺伝子がどのように発現応答するのかその相関を定量的に解析することが可能である。その準備としてTbプロモーターとGFPレポーター遺伝子との融合構築およびSM50プロモーターとRFPレポーター遺伝子の融合構築を作製した。
2) 細胞間相互作用が発現ゆらぎに与える影響の解析
2種類の蛍光遺伝子を連結したTbプロモーター構築をウニ胚に導入し、16細胞期まで培養し、将来予定中胚葉細胞を単離・培養した。しかしながら、2種類の構築が導入された胚が少なく、経時的に観察することができなかった。また、培養した中胚葉細胞が運動し、長時間での観察するための改善が必要と考えられ、現在観察条件を検討している。
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