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2011 Fiscal Year Annual Research Report

リベロマイシン誘導体創製に向けた新規生合成酵素群の反応機構解明

Research Project

Project/Area Number 21580104
Research InstitutionThe Institute of Physical and Chemical Research

Principal Investigator

高橋 俊二  独立行政法人理化学研究所, 化学情報・化合物創製チーム, チームヘッド (30311608)

KeywordsリベロマイシンA / ポリケチド / スピロアセタール / 放線菌 / 生合成 / P450
Research Abstract

1.遺伝子破壊と中間代謝産物の解析:リベロマイシン生産菌から同定したリベロマイシン生合成遺伝子クラスターの機能解析に向けて全遺伝子の破壊株を作製し、蓄積した中間代謝産物の単離・構造解析を行った。これにより生合成経路を推定するために必要な多くのリベロマイシン類縁体の構造が明らかとなった。一方、不安定な中間体を経由する場合には代謝中間産物の特定が困難であることから、異種発現酵素を用いて反応を解析した。その結果、RM-A1a(トリオール中間体)を基質としてジヒドロキシケトン合成酵素(RevG)及びスピロアセタール環化酵素(RevJ)により立体特異的にスピロアセタール環を形成することが明らかになった。これまでに非酵素的に進行すると考えられてきた脱水環化反応に酵素が関与することが初めて示された。立体特異的スピロアセタール化合物を化学合成することは困難であるため、RevG及びRevJを用いた酵素的合成法は新規化合物創製につながる。
2.生化学反応の解析:異種発現が困難であったフラビン(FAD)依存酵素の可溶化条件を更に検討した。大腸菌のコドン使用頻度を考慮した人工DNAを用いることにより、FADが結合した高活性の酵素を調製し、酸化反応を解析することに成功した。脂肪酸-ポリケチドハイブリット形成に必要な鍵酵素(脂肪酸-CoAリガーゼ)を調製し、飽和及び不飽和脂肪酸を用いて基質特異性を明らかにした。
3.X線結晶解析:P450の結晶構造をもとにしてアミノ酸の部位特異的変異導入を行った。変異導入後の活性減少が問題であり、活性を損なわない部位への変異導入を検討した。FAD依存酵素、脂肪酸-CoAリガーゼについては、結晶解析に適した、良好な結晶の創出に向けた条件を検討した。
以上、基盤研究(C)補助金を得ることによりリベロマイシン生合成について飛躍的な研究成果を上げることが出来た。

  • Research Products

    (26 results)

All 2012 2011

All Journal Article (7 results) (of which Peer Reviewed: 7 results) Presentation (18 results) Patent(Industrial Property Rights) (1 results)

  • [Journal Article] Spirotoamides A and B, novel 6,6-spiroacetal polyketides isolated from a microbial metabolite fraction library2012

    • Author(s)
      Nogawa T
    • Journal Title

      J.Antibiot.

      Volume: (In press)

    • DOI

      doi:10.1038/ja.2011.121

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Reveromycin A biosynthesis uses RevG and RevJ for stereospecific spiroacetal formation2011

    • Author(s)
      Takahashi S
    • Journal Title

      Nat.Chem.Biol.

      Volume: 7 Pages: 461-468

    • DOI

      doi:10.1038/nchembio.583

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Furaquinocins I and J : Novel polyketide isoprenpid hybrid compounds from Streptomyces reveromyceticus SN-5932011

    • Author(s)
      Panthee S
    • Journal Title

      J.Antibiot.

      Volume: 67 Pages: 509-513

    • DOI

      doi:10.1038/ja.2011.41

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Detection of cytochrome P450 substrates using small-molecule droplet array on NADH-immobilized solid surface2011

    • Author(s)
      Takayama H
    • Journal Title

      ChemBioChem.

      Volume: 12 Pages: 2748-2752

    • DOI

      doi:10.1002/cbic.201100541

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Improvement of transformation efficiency by strategic circumvention of restriction barriers in Streptomyces griseus2011

    • Author(s)
      Suzuki H
    • Journal Title

      J.Microbiol.Biotechnol.

      Volume: 21 Pages: 675-678

    • DOI

      doi:10.4014/jmb.1102.02038

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Gene disruption and biochemical characterization of verruculogen synthase of Aspergillus fumigates2011

    • Author(s)
      Kato N
    • Journal Title

      ChemBioChem.

      Volume: 12 Pages: 711-714

    • DOI

      doi:10.1002/cbic.201000562

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Genetic safeguard against mycotoxin cyclopiazonic acid production in Aspergillus oryzae2011

    • Author(s)
      Kato N
    • Journal Title

      ChemBioChem.

      Volume: 12 Pages: 1376-1382

    • DOI

      doi:10.1002/cbic.201000672

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] サクシニル化に関わるリベロマイシン生合成遺伝子の機能解析2012

    • Author(s)
      高橋俊二
    • Organizer
      日本農芸化学会
    • Place of Presentation
      京都・京都女子大
    • Year and Date
      20120322-20120326
  • [Presentation] リベロマイシン生合成における多段階酵素反応の再構築2012

    • Author(s)
      熊野匠人
    • Organizer
      日本農芸化学会
    • Place of Presentation
      京都・京都女子大
    • Year and Date
      20120322-20120326
  • [Presentation] 2-アルキルマロニル-CoA生合成機構の解析2012

    • Author(s)
      宮澤岳
    • Organizer
      日本農芸化学会
    • Place of Presentation
      京都・京都女子大
    • Year and Date
      20120322-20120326
  • [Presentation] β-carboline compounds as biomediators of secondary metabolism in Streptomyces reveromyceticus2012

    • Author(s)
      Suresh Panthee
    • Organizer
      日本農芸化学会
    • Place of Presentation
      京都・京都女子大
    • Year and Date
      20120322-20120326
  • [Presentation] 新規ポリケチド代謝産物Linearolides生合成遺伝子の解析2012

    • Author(s)
      小城尚文
    • Organizer
      日本農芸化学会
    • Place of Presentation
      京都・京都女子大
    • Year and Date
      20120322-20120326
  • [Presentation] Streptomyces sp.RK95-74株のゲノム解析と二次代謝産物の生合成遺伝子群2012

    • Author(s)
      植木雅志
    • Organizer
      日本農芸化学会
    • Place of Presentation
      京都・京都女子大
    • Year and Date
      20120322-20120326
  • [Presentation] Exquisite control of Spiroacetal Formation in reveromycin A biosynthesis2012

    • Author(s)
      高橋俊二
    • Organizer
      The 6^<th> Korea-Japan Chemical Biology Symposium
    • Place of Presentation
      札幌・定山渓(招待講演)
    • Year and Date
      20120126-20120128
  • [Presentation] Deciphering of reveromycin A biosynthesis and the production of novel derivatives2011

    • Author(s)
      長田裕之
    • Organizer
      16^<th> International Symposium on the Biology of Actinomycetes
    • Place of Presentation
      Puerto Vallarta, Mexico
    • Year and Date
      20111211-20111215
  • [Presentation] Mechanism of 2-alkylmalonyl-CoA formation in reveromycin A biosynthesis2011

    • Author(s)
      Shunji Takahashi
    • Organizer
      16^<th> International Symposium on the Biology of Actinomycetes
    • Place of Presentation
      Puerto Vallarta, Mexico
    • Year and Date
      20111211-15
  • [Presentation] 微生物代謝産物フラクションライブラリーより単離した新規スピロアセタールポリケチド、スピロトアミドAおよびBの構造2011

    • Author(s)
      野川俊彦
    • Organizer
      第53回天然有機化合物討論会
    • Place of Presentation
      大阪・大阪国際交流センター
    • Year and Date
      20110927-20110929
  • [Presentation] 化合物アレイ型プラットフォームを用いたcytochrome P450の基質スクリーニング法の開発2011

    • Author(s)
      叶直樹
    • Organizer
      第53回天然有機化合物討論会
    • Place of Presentation
      大阪・大阪国際交流センター
    • Year and Date
      20110927-20110929
  • [Presentation] Identification of key enzymes involved in spiroacetal formation in reveromycin A biosynthesis2011

    • Author(s)
      高橋俊二
    • Organizer
      IUMS(International union of microbiological societies)放線菌学会共催
    • Place of Presentation
      札幌・札幌コンベンションセンター
    • Year and Date
      20110907-20110915
  • [Presentation] Identification of key enzymes involved in spiroacetal formation in reveromycin A biosynthesis2011

    • Author(s)
      高橋俊二
    • Organizer
      IUMS (International union of microbiological societies)
    • Place of Presentation
      札幌・札幌コンベンションセンター(招待講演)
    • Year and Date
      20110907-20110915
  • [Presentation] Novel furaquinocins isolated from Streptomyces reveromyceticus2011

    • Author(s)
      Suresh Panthee
    • Organizer
      IUMS(International union of microbiological societies)放線菌学会共催
    • Place of Presentation
      札幌・札幌コンベンションセンター
    • Year and Date
      20110907-20110915
  • [Presentation] A novel anthraquinone derivative from Streptomyces reveromyceticus identified by using Fraction Library Database2011

    • Author(s)
      高木海
    • Organizer
      IUMS(International union of microbiological societies)放線菌学会共催
    • Place of Presentation
      札幌・札幌コンベンションセンター
    • Year and Date
      20110907-20110915
  • [Presentation] Biosynthetic pathway of new polyketides produced by Streptomyces sp.RK95-742011

    • Author(s)
      植木雅志
    • Organizer
      IUMS(International union of microbiological societies)放線菌学会共催
    • Place of Presentation
      札幌・札幌コンベンションセンター
    • Year and Date
      20110907-20110915
  • [Presentation] Analysis of 2-alkylmalonyl-CoA biosynthesis2011

    • Author(s)
      宮澤岳
    • Organizer
      IUMS(International union of microbiological societies)放線菌学会共催
    • Place of Presentation
      札幌・札幌コンベンションセンター
    • Year and Date
      20110907-20110915
  • [Presentation] In vitro reconstruction of post-PKS modification in RM-A biosynthesis2011

    • Author(s)
      熊野匠人
    • Organizer
      IUMS(International union of microbiological societies)放線菌学会共催
    • Place of Presentation
      札幌・札幌コンベンションセンター
    • Year and Date
      20110907-20110915
  • [Patent(Industrial Property Rights)] ポリケチド化合物の製造方法2011

    • Inventor(s)
      長田裕之、高橋俊二、清水猛、林輝雄
    • Industrial Property Rights Holder
      独立行政法人理化学研究所
    • Industrial Property Number
      特願2011-178620
    • Filing Date
      2011-08-17

URL: 

Published: 2013-06-26  

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