2009 Fiscal Year Annual Research Report
アフィニティーナノスプレー針を用いた、分子群特異的一細胞質量分析法の開発
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21590041
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| Research Institution | Hiroshima University |
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Principal Investigator |
津山 尚宏 Hiroshima University, 大学院・医歯薬学総合研究科, 講師 (10335747)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
升島 努 広島大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 教授 (10136054)
水野 初 広島大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 助手 (30457288)
原田 隆範 広島大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 研究員 (30350325)
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| Keywords | 質量分析 / 一細胞分析 / ナノスプレー / メタボローム |
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| Research Abstract |
従来の多細胞分析ではとらえることのできない細胞内の短時間で限局的な現象の分子変化を捉えるため、nanoESIチップを用い顕微鏡観察下で生細胞の狙った場所・瞬間の質量分析を行うことのできる一細胞ビデオマススコープ法を開発した。この方法の網羅性や感度を上げ細胞調節に関与する微量分子を検出するためには、前処理濃縮が不可欠であると考えられた。本研究では、細胞調節に関与する局所微量分子の検出を目的とし、アフィニティー分子を内面に修飾したナノスプレーチップを作成し、さらに分子の溶解度や極性を制御することにより脂質やイオンを選択的に濃縮し、微量物質の高感度一細胞質量分析を行うことのできる系を開発することを目標とした。
ガラスの内面を腐食させたナノスプレーチップを作成し、腐食による影響を未処理チップと比較したところ、低分子検出効率の上昇が認められた。ガラス針の内面修飾は、腐食・中和処理を行ったチップ内部にトリメトキシオクダデシルシランで高温処理を行った。このチップに極性の異なる脂肪酸などを導入・洗浄し質量分析による検出を行い評価したところ、低極性分子が選択的に残留していることが確認できた。また、洗浄・溶媒条件を変えながら検討したところ、内面を腐食させた未修飾チップでも極性分子の効率的な分取が認められたことから、内面腐食未修飾チップおよびODSチップで1細胞内分子の網羅的検出が可能かどうか今後検討を行う。
また質量スペクトル中の環境物質由来ピークを抑制するため、イオン源を密閉状態とし活性炭で狭雑物を除去した窒素ガスを送り込み、質量分析を行ったところ環境物質由来ピークの大幅な抑制が認められた。今後、1細胞微量分析への適用を検討する。
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