2009 Fiscal Year Annual Research Report
肝分化・肝再生におけるdickkopf3の作用機序の解明
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21590414
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| Research Institution | University of Tsukuba |
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Principal Investigator |
加野 准子 University of Tsukuba, 大学院・人間総合科学研究科, 講師 (60334059)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
野口 雅之 筑波大学, 大学院・人間総合科学研究科, 教授 (00198582)
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| Keywords | 肝臓 / 細胞 / シグナル伝達 / 発生 / 分化 |
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| Research Abstract |
本研究はdickkopf3(Dkk3)が肝分化の分子機構解明のキィー分子の一つと仮定し、Dkk3の受容体の同定や作用シグナル分子の探索を行い、Dkk3の肝分化、再生における機能を明らかにすることを目的としている。平成21年度は計画の初年度として以下の研究を行った。
1.Dkk3受容体の同定
(1)Dkk3発現を調べ、受容体同定に使用する蛋白サンプルを採取する細胞株候補を選択した。
(2)肝芽腫細胞株HuH6-Cl5と当研究室で樹立したヒト非腫瘍肝組織由来不死化肝細胞株tPH5CHを含む数種の細胞株はDkk3を高発現することが確認された。HuH6-Cl5、tPH5CHはRNAiによりDkk3発現を抑制すると増殖が低下し、Dkk3が機能していることが推測された。
(3)(2)の結果から、tPH5CHの蛋白を用い、Pull-down assay及びCo-immunoprecipitation assayを行い、Dkk3結合蛋白質サンプルを得た。さらにSDS-PAGE、銀染色、LC-MS/MS解析によってDkk3結合蛋白質サンプルに含まれる蛋白を同定した。現在、受容体候補分子について、Western blottingなどによってDkk3との結合を確認中である。
2.Dkk3ノックアウトマウスを用いた肝再生における機能解析
(1)Dkk3ホモ、ヘテロ型ノックアウトマウスを理研バイオリソースセンターに提供依頼した。
(2)ホモ型は現在繁殖中である。今後繁殖したノックアウトマウスの部分肝切除、四塩化炭素肝障害モデルを用い、肝再生におけるDkk3の機能を解析する予定である。
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Research Products
(3 results)
