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2010 Fiscal Year Annual Research Report

市中に出現するPVL陽性MRSAの調査とその病原性に関する研究

Research Project

Project/Area Number 21590493
Research InstitutionJuntendo University

Principal Investigator

伊藤 輝代  順天堂大学, 医学部, 准教授 (10095763)

KeywordsMRSA / PVL / ラテックス凝集反応 / Cell
Research Abstract

1. 本年度は順天堂病院由来株7株、順天堂練馬病院由来株4株、順天堂静岡病院の皮膚科外来MRSA15株MSSA45株を対照として、PVL遺伝子の保有を調べたが、陽性株は検出されなかった。次年度は対象株の枠を広げて検討を続ける予定。しかし、これらの株の中には新規SCCmecを持つ株が多いことを見出し、現在塩基配列の決定を行っている。
2. 順天堂医院患者の同意を得て成人血清(30検体)、小児血清(26検体)を分与いただき、酵素抗体法にてブドウ球菌に対する抗体価及びPVLに対する抗体価を酵素抗体法にて測定した(倫理委員会承認ずみ)。ブドウ球菌は免疫グロブリンを非特異的に吸着するプロテインAを欠落させたRN4220株を用いた。成人に比して、小児血清のブドウ球菌に対する抗体価は全体的に低かった。またPVLに対する抗体価の測定は現在まで成人血清3検体、小児血清5検体ともに低かった。本研究で想定したのは、他の白血球溶解酵素との交差反応性であり、交差反応すること、及び少数の小児では交差反応が低い場合が多い傾向が検討した範囲内で確認された。
3. CA-MRSAの代表株の一つであるUSA400MW2株の培養上清を用いて、ヒト好中球に対する細胞障害活性をFlow cytometryの手法により解析した。培養上清は、PVL蛋白質の産生量が多いと報告されているCCY培地を用いて約19時間培養後、上清を回収し、回収した培養上清をmembrane filterによる過後、-80℃に保存した。使用時、培養上清をPBS(-)にて、10、50、100、250、500、1000倍希釈し、細胞と室温にて約0.5-2.0時間反応させ、Flow cytometryにて解析を行った。MW2培養上清は、ヒト好中球を破壊し、その作用は希釈倍率及び作用時間依存的であった。また、抗PVLモノクローナル抗体の存在下では、ヒト好中球の破壊が有意に抑制され、好中球破壊にPVLが関与していることが明らかになったが、高濃度の培養上清を用いた場合には、モノクローナル抗体存在下でも好中球溶解を完全には抑制できず、PVL以外の他のleukocidinが好中球溶解に関与している可能性が示唆された。

  • Research Products

    (11 results)

All 2011 2010 Other

All Journal Article (6 results) (of which Peer Reviewed: 6 results) Presentation (3 results) Remarks (2 results)

  • [Journal Article] Dissemination of multiple MRSA clones among community-associated methicillin-resistant Staphylococcus aureus infections from Japanese children with impetigo.2011

    • Author(s)
      Hisata K, Ito T, Matsunaga N, Komatsu M, Jin J, Li S, Watanabe S, Shimizu T, Hiramatsu K.
    • Journal Title

      J Infect Chemother

      Volume: (In press)

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Transcription and translation products of the cytolysin gene psm-mec on the mobile genetic element SCCmec regulate Staphylococcus aureus virulence.2011

    • Author(s)
      Kaito C, Saito Y, Nagano G, Ikuo M, Omae Y, Hanada Y, Han X, Kuwahara-Arai K, Hishinuma T, Baba T, Ito T, Hiramatsu K, Sekimizu K.
    • Journal Title

      PLoS Pathog.

      Volume: 7 Pages: e1001267

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Novel types of staphylococcal cassette chromosome mec elements identified in CC398 methicillin resistant Staphylococcus aureus strains2011

    • Author(s)
      Shanshuang Li, Robert Leo Skov, Xiao Han, Anders Rhod Larsen, Jesper Larsen, Marit Sorum, Mireille Wulf, Andreas Voss, Keiichi Hiramatsu, Teruyo Ito
    • Journal Title

      Antimicrob Agents Chemother.

      Volume: (In press)

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] A report for controlling the dissemination of Panton-Valentine leukocidin-positive Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus clone at a Boarding School in Japan2011

    • Author(s)
      Masaaki Higashiyama, Teruyo Ito, Xiao Han, Akemi Tanno, Toshiko Wada, Youichi Funaoka, Yusuke Yoshida, Kei Mikita, Tomomichi Ogawa, Junichiro Nishiyama, Yasushi Okusa, Koki Kaku, Junichi Hatada, Keiichi Hiramatsu, Akihiko Kawana
    • Journal Title

      American Journal of Infection control

      Volume: (In press)

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Epidural abscess caused by community-associated methicillin-resistant Staphylococcus aureus strain USA300 in Japan2010

    • Author(s)
      Higashiyama M, Ito T, Han X, Ono K, Minamimura K, Sakakibara F, Tanno A, Nishiyama J, Hatada J, Hiramatsu K, Kawana A.
    • Journal Title

      J Infect Chemother

      Volume: 16(5) Pages: 345-9

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] 市中獲得型MRSA(CA-MRSA)の高病原性に関する研究:オキサシリン高度耐性化とfudoh領域の影響2010

    • Author(s)
      茅野崇、菱沼知美、松尾美記、張萌、伊藤輝代、森本ゆふ、平松啓一
    • Journal Title

      順天堂医学

      Volume: 56 Pages: 56-67

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] ST59株の保持する新規PVLファージの同定2010

    • Author(s)
      張萌、伊藤輝代、李善爽、平松啓一
    • Organizer
      第55回ブドウ球菌研究会
    • Place of Presentation
      東京慈恵会医科大学
    • Year and Date
      20100700
  • [Presentation] Organization of genomes of PVL-carrying phages2010

    • Author(s)
      Meng Zhang, Teruyo Ito, Shanshuang Li, Keiichi Hiramatsu
    • Organizer
      第83回日本細菌学会総会
    • Place of Presentation
      パシフィコ横浜
    • Year and Date
      20100327-20100329
  • [Presentation] MRSA JCSC294株のoriC envilronの解析2010

    • Author(s)
      細谷志乃、伊藤輝代、近藤陽子、李善爽、張萌、平松啓一
    • Organizer
      第83回日本細菌学会総会
    • Place of Presentation
      パシフィコ横浜
    • Year and Date
      20100327-20100328
  • [Remarks]

    • URL

      http://www.staphylococcus.net/

  • [Remarks]

    • URL

      http://www.SCCmec.org/

URL: 

Published: 2012-07-19  

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