2010 Fiscal Year Annual Research Report
アクセサリー蛋白質による(-)鎖RNAウイルスのゲノム複製制御
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21590510
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| Research Institution | Hiroshima University |
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Principal Investigator |
坂口 剛正 広島大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 教授 (70196070)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
入江 崇 広島大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 准教授 (70419498)
清谷 克寛 広島大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 講師 (00106824)
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| Keywords | ウイルス / パラミクソウイルス / センダイウイルス / ゲノム極性 / C蛋白質 / cDNAからのウイルス産生系 / プロモーター |
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| Research Abstract |
1.リーダープロモーターとトレーラープロモーターを全置換した変異ウイルスの作製
プロモーターを全置換したウイルスゲノムcDNAを構築し、両端にリーダー(Le)あるいはトレーラー(Tr)配列を、考えられる4種類の組み合わせでもつウイルスを得ている。これらのウイルスの同調感染後のゲノム極性の変化を細かいタイムコースで解析している。
C蛋白質のプロモーターへの作用を検討するために、これらの変異の上に、さらにC蛋白質を欠損するウイルスの作製を試みたが、ウイルスは少量生成しているものの、手持ちの培養細胞あるいは発育鶏卵で増幅することができない状況が続いている。予定していた、GFP融合C蛋白質を独立した遺伝子としてもち、GFPをノックダウンすることで、C蛋白質の量を調整できるウイルスの作製は進行中である。
2.C蛋白質変異株の解析
C蛋白質の一連の点変異ウイルスを検討した結果、一部の変異株Cm2では、RNA合成に異常があり、+ゲノムが蓄積することを発表した。一方、Cm2では、感染細胞でIFN-βの合成とアポトーシスによると思われる細胞死が進むことが明らかになった。RNA合成調節が自然免疫から逃れる機能と関連することが示唆された。現在は、Cm2を含む一連の変異株のマウス、RIG-Iノックアウトマウスへの感染実験を行っている。また、RIG-I,MDA5,IRF3ノックアウトマウスなどに由来する胎児性線維芽細胞でのウイルス増殖と細胞死を検討している。
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