2010 Fiscal Year Annual Research Report
新規ヒト化マウスを用いたHTLV-1感染症に対する免疫療法の基礎研究
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21590512
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| Research Institution | University of the Ryukyus |
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Principal Investigator |
齊藤 峰輝 琉球大学, 医学研究科, 准教授 (40398285)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
田中 勇悦 琉球大学, 医学研究科, 教授 (30163588)
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| Keywords | 免疫学 / 感染防御 / ワクチン / HTLV-1 / HAM |
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| Research Abstract |
ヒト末梢血単核球(PBMC)を移植したヒト化マウス体内でヒトの抗HTLV-1免疫応答を効率よく誘導できる系を確立した。具体的には、HTLV-1感染細胞株MT-2と新鮮なHTLV-1非感染ヒトPBMCを1:1で混合し、計200万個の細胞を免疫不全マウス(RAG2/γCnull,NOG系統)の脾臓内に直接接種した後、接種2週間後にマウスから末梢血と血漿、脾臓細胞を回収した。各々からヒトCD4陽性、ヒトCD8陽性分画をMACS beadsを用いて分離精製し、ゲノムDNA、cDNAを抽出し、抽出したゲノムDNA、cDNAをtemplateにgenomic PCR,RT-PCRを行い、マウス体内でヒトPBMCにHTLV-1感染が成立していることを確認した。さらに、末梢血単核球、脾臓細胞をin vitroで12時間培養し、フローサイトメトリーでTax蛋白の検出を試みた結果、末梢血単核球、脾臓細胞から分離したヒトCD4,CD8陽性細胞双方からHTLV-1プロウイルス、taxおよびHBZ mRNAが検出され、マウス体内でヒトPBMCに感染が成立することが明らかになった。さらに、各種HTLV-1感染T細胞株を用いて検討したところ、in vitroにおいてはHAM患者由来のILT-Myj株がもっとも高い感染効率を示すことを見い出した。
一方、2日間の培養で効率よく免疫応答を誘導できる新規DC誘導法を確立した。この新規培養法を用いて、HTLV-1感染細胞株の抽出液で感作した成熟DCをHTLV-1非感染ヒトPBMCと同時に脾臓内に移植したところ、脾臓から回収したヒトPBMCに抗HTLV-1細胞性免疫応答が誘導できることを見い出した。しかし、抗HTLV-1液性免疫応答は誘導できなかった。また、報告されている抗HTLV-1 CTLのimmunodominant peptide(Taxペプチド)で感作したところ、抗HTLV-1細胞性・液性免疫応答ともに認められなかった。
現在、最も効率のよいDC感作法(不活化HTLV-1、ペプチド、DNAやアジュバント)の選択、最も効率のよい成熟DCの誘導法、またそれらの組み合わせについて検討中である。
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