2009 Fiscal Year Annual Research Report
肝細胞癌で強発現するWT1,PKRのC型肝炎ウイルス発癌・進展における臨床的役割
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21590848
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| Research Institution | Ehime University |
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Principal Investigator |
日浅 陽一 Ehime University, 医学部附属病院, 講師 (70314961)
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| Keywords | WT1遺伝子 / 肝細胞癌 / C型肝炎ウイルス / 細胞増殖 / siRNA / HCV粒子生成可能複製系 / アポトーシス / 細胞接着因子 |
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| Research Abstract |
1. 肝細胞癌株をもちいた、WT1遺伝子の発現増強に伴う宿主細胞遺伝子の変化
肝細胞癌株(Huh7,Huh7.5.1,HepG2,HLE)においてWT1発現プラスミドをトランスフェクションして宿主細胞遺伝子の変化を確認した。WT1発現増強に伴う宿主遺伝子の変化をPCRアレイを用いて網羅的に解析を行ったところ、細胞増殖、細胞接着、アポトーシス、血管新生に関連する遺伝子の発現量に変化が見られた。PCRアレイで変化のある遺伝子についてリアルタイムPCR、蛋白発現についてWestern Blotで確認している。
2. 肝細胞癌株をもちいた、WT1遺伝子の発現抑制に伴う宿主細胞遺伝子の変化
肝細胞癌株(Huh7,Huh7.5.1,HepG2,HLE)においてWT1 siRNAをトランスフェクションしてWT1発現をノックダウンして宿主細胞遺伝子の変化を確認した。発現増強時と相反して変化する遺伝子を複数同定した。候補遺伝子の変化を確認している。アポトーシスについては、annexin V染色を用いてフローサイトメトリーを用いて行い、WT1発現抑制によるアポトーシスの変化について解析している。
3. 複数細胞株を用いた、複数のHCV複製系の確立によるC型肝細胞癌モデルの作成
HCV genotype 1a株であるH77を用いたHCV複製系をHuh7,HepG2など複数の肝癌由来細胞株で確立した。また、このHCV複製系に加えて、JFH-1株と、Huh7.5.1細胞を用いたHCV粒子生成可能複製系を立ち上げ、細胞内、および培養上清中にHCV core蛋白が高濃度に検出されることを確認した。今後、これらの系に加えて、H77-sを用いたHCV genotype 1aの粒子形成可能な複製系を立ち上げ、これら複数のHCV複製系を用いてWT1とHCV、さらにPKRとの関連について解析していく予定である。
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