2010 Fiscal Year Annual Research Report
脂質転送蛋白と脂質応答性転写因子の腎線維化抑制作用の解析と新規治療薬の探索
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21591024
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| Research Institution | University of Fukui |
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Principal Investigator |
木村 秀樹 福井大学, 医学部, 准教授 (20283187)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
吉田 治義 福井大学, 医学部, 教授 (80135574)
糟野 健司 福井大学, 医学部附属病院, 助教 (60455243)
菅谷 健 東京歯科大学, 歯学部, 客員講師 (40381561)
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| Keywords | ファルネソイドX受容体(FXR) / ペルオキシゾーム増殖薬活性化受容体(PPAR) / 脂肪酸結合蛋白 / プラスミノーゲンアクチベーターインヒビタ-1(PAI-1) / MCP-1 / 低酸素 / TNF-α / TGF-β |
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| Research Abstract |
1) ヒト近位尿細管上皮培養細胞(HPTEC)でのPPAR-α,δ,γ発現の検討とPPAR活性の確認
ヒトの近位尿細管上皮培養細胞において、ペルオキシゾーム増殖薬活性化受容体(PPAR)-α,β,γのmRNA発現をreal time PCR法で確認し、PPAR-γ,δ蛋白発現をImmunoblot法で確認した。PPAR-α活性化薬のパルミチン酸(30μM)、PPAR-δ活性化薬のGW516(10μM)、PPAR守活性化薬のピオグリタゾン(Pio:3μM)とPGJ2(5μM)、アンギオテンシンII受容体拮抗薬(ARB)であるテルミサルタン(Telm:10μM)はpPPRE-TK-lucの活性を増強し、Pio, PGJ2の活性はPPAR-γ阻害薬GW9662で、Telmの活性はPPAR-δ阻害薬GSK0660で特異的に阻害された。また、Pio, GW516, Telmは、PPARの下流遺伝子である心型(H-)・肝型(L-)脂肪酸結合蛋白(FABP)、liver X受容体-α(LXR-α)のmRNA発現を増強した。
2) 低酸素刺激,TNF-α, TGF-βでの培養ヒト・マウス近位尿細管上皮細胞のFABP、PPAR、FXR発現動態とPPAR活性化の抗炎症・抗線維化作用の検討
HPTECの48時間低酸素刺激で、PPAR-γ mRNA発現が高度(50%以上)に減少し、PPAR-α,βとRXRsは軽度(20-30%)に減少し、RARsとFXRの発現量は不変であった(cDNAアレイ解析)。TNF-α(10ng/ml)あるいはTGF-β(5ng/ml)は、PPAR-γ、H-・L-FABP, LXR-αのmRNA発現を抑制した。マウス近位尿細管上皮細胞(mProx)にヒトL-FABPのゲノム遺伝子を導入したL-FABP-mProxでは、パルミチン酸によるPPRE活性亢進が約60%程度増強し、PPAR-amRNAが約10倍に増加した。また、L-FABP-mProxでは、基底状態、TNF-a誘導性のMCP-1発現がmProxに比して、有意に低下した。
ARBとPPAR作用を有するTelmは、基底状態のVEGF-C発現とPAI-1発現を抑制したが、PPAR-γ作用を有さないARBであるエプロサルタン(10μM)は、PAI-1発現を抑制しなかった。Telmは、TNF-a誘導性のVEGF-C発現とTGF-β誘導性のPAI-1発現も20-30%程度抑制した。さらに、TNF-αのVEGF-C発現に関するシグナル経路の解析では、ERK経路ではなくp38MAPK経路を介している可能性が見出された。
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