2010 Fiscal Year Annual Research Report
胚性幹細胞を用いたエリスロポエチン産生細胞の同定と単離
| Project/Area Number |
21591037
|
|---|
| Research Institution | Nara Medical University |
|---|
Principal Investigator |
久保 篤史 奈良県立医科大学, 医学部, 助教 (30316062)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
岩野 正之 奈良県立医科大学, 医学部, 講師 (20275324)
|
|---|
| Keywords | 胚性幹細胞 / ES細胞 / エリスロポエチン |
|---|
| Research Abstract |
1. Epo-EGFP ES細胞、マウスの樹立
Epo遺伝子座に相同組み換えによりEGFPを組み込むためにtargeting vectorを作製した。Epo遺伝子のシグナル・ペプチドと開始コドンを削除する形で、EGFP-IRES-puroR遺伝子を組み込むベクターを作成した。このベクターをC57BL/6マウス由来のES細胞にエレクトロポレーションすることにより、相同組み換えを行い、Epo遺伝子座にGFPを組み込んだES細胞を樹立した(Epo-EGFP ES細胞)。
2. Epo-EGFP ES細胞からGFP陽性細胞の単離
ES細胞を血清を用いる中胚葉条件で分化し、GFP陽性細胞がより多く出現する条件をFACSで検索している。現在のところ中胚野分化条件で2-3%のGFP陽性細胞を認めるために、陽性細胞をFACS sorterでソートして単離を試みている。
3. Epo-EGFPマウスからGFP陽性細胞の同定
Epo-EGFP ES細胞を胚に導入することで、Epo-EGFPヘテロマウスを作成した。ヘテロマウスの腎臓を蛍光顕微鏡で観察することにより、腎臓でのGFP陽性細胞の局在を検討している。蛍光顕微鏡での観察では、糸球体よりも間質にGFP陽性細胞を多く認めた。また。ヘテロマウスの腎臓から単離した細胞をFACSにより解析し、腎臓でのEPO陽性細胞の単離を試みている。現在、マウス腎皮質を分離し、コラゲナーゼで均一にsingle cellにできるよう条件設定をしており、single cell suspensionの後にFACS解析を行い、数%の陽性細胞を確認している。今後は、単離細胞数を増加させて、FACSでソートを試みる予定である。
|
-
[Journal Article] The Homeobox Gene Hex regulates hepatocyte differentiation from embryonic stem cell-derived endoderm2010
Author(s)
Kubo A, Kim YH, Irion S, Kasuda S, Takeuchi M, Ohashi K, Iwano M, Dohi Y, Saito Y, Snodgrass R, Keller G
-
Journal Title
Hepatology
Volume: 51
Pages: 633-641
-
