変異SOD1導入グリアが引き起こす運動ニューロン傷害機序の解明

2009 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 21591083
• Research Institution: Okayama University
• Principal Investigator: 永井 真貴子 Okayama University, 大学病院, 助教 (80420488)
• Keywords: 筋萎縮性側索硬化症 / ALS / SOD1 / アストロサイト / 神経変性 / 脊髄 / RNA

Research Abstract

(1)運動ニューロンと変異型SOD1アストロサイトの共培養において、コントロールアストロイトとの共培養と比較して発現量が変化するcDNAのリストを作製した。具体的には胎齢12.5日のマウス胎仔脊髄から初代培養した運動ニューロン(MN)と変異型SOD1(G93ASOD1AST)あるいは野生型SOD1アストロサイト(WTSOD1AST)の共培養からmRNAを抽出した。mRNAをcDNAに逆転写後、サブトラクション法を用いて発現量が増減するcDNAのリストを作製し、BLASTで遺伝子を同定した。
(2)発現量が増加したmRNAは134あった。続いて変異SOD1(G93A)DNAを導入したALSマウスおよびコントロールマウス脊髄からmRNAを抽出し、(1)のcDNAの一部をプローブとして、ノザンブロッティングあるいは定量的RT-PCRを行い、組織で発現量が増加しているcDNAを選択した。発現レベルが増加しているmRNAについてはALSマウス脊髄を用いてin situ hybridizationを行い、発現細胞を同定した。
(3)(2)で同定したcDNAの全長をRT-PCRを用いて取り出し、タンパク発現ベクターにサブクローニングを行った。またその中から特にモデルマウス脊髄で発現量の多かった遺伝子Aについてトランスジェニックマウスを作成した。

Research Products

• [Journal Article] Spinal anterior horn has the capacity to self-regenerate in amyotrophic lateral sclerosis model mice. (2009)
  • Author(s): Miyazaki K, Nagai M, Morimoto N, Kurata T, Takehisa Y, Ikeda Y, Abe K
  • Journal Title: J Neurosci Res. 87(16) Pages: 3639-3648
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Progressive decrease in the level of YAPdeltaCs, prosurvival isoforms of YAP, in the spinal cord of transgenic mouse carrying a mutant SODI gene. (2009)
  • Author(s): Morimoto N, Nagai M, Miyazaki K, Kurata T, Takehisa Y, Ikeda Y, Kamiya T, Okazawa H, Abe K
  • Journal Title: J Neurosci Res. 87(4) Pages: 928-936
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Mitochondrial alterations in transgenic mice with an H46R mutant Cu/Zn superoxide dismutase gene. (2009)
  • Author(s): asaki S, Aoki M, Nagai M, Kobayashi M, Itoyama Y
  • Journal Title: J Neuropathol Exp Neurol. 68(4) Pages: 365-373
  • Peer Reviewed
• [Presentation] ALS患者における栄養管理と生命予後 (2009)
  • Author(s): 永井真貴子、出口健太郎、名古谷章子、池田佳生、阿部康二
  • Organizer: 第27回日本神経治療学会総会
  • Year and Date: 2009-06-11