2011 Fiscal Year Annual Research Report
新規のタンパク質発現量調節システムを応用した造血幹細胞の生体内運命決定の制御
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21591231
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
大津 真 東京大学, 医科学研究所, 特任准教授 (30361330)
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| Keywords | 造血幹細胞 / レトロウイルスベクター / レンチウイルスベクター / 発現調節 / 細胞老化 |
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| Research Abstract |
計画に従いタンパク質発現誘導を生体内で可能にするシステムの構築を進めた。研究初期において、本計画の中核を成すdegradation-domain(DD)/Shield-1システムにおける発現リークの問題に直面し、ベクター骨格に改変を加える等で克服を目指したが、結果的に当システムの系としての限界が明らかとなった。次年度から計画を変更し、Bujardらによる遺伝子発現誘導系、Tetracycline-inducibleシステムとDD-システムとの融合系の構築を検討した。backbonevectorとして当研究室の開発による、「ドキシサイクリン添加によって目的遺伝子の発現をONにする全ての必要エレメントを含んだレンチウイルスベクター(All-in-OneLV)」を使用した。このベクター中の(r)tTAエレメントをtTAと交換してAll-in-One LVのTet OFF versionを構築し、それぞれAIO-On、AIO-Offと命名した。この両ベクターに、DD-赤色蛍光タンパク融合遺伝子をクローニングし、産生ウイルスによって血球系がん細胞株へと導入を行った。得られた安定細胞株を用いてドキシサイクリンによる転写調節とShield-1による翻訳後発現調節の組み合わせを試み、FACS解析により定量的に目的蛍光タンパクの発現量評価を行った。結果、発現リークの抑制および発現調節特性の面で、AIO-OnとDD-システムの組み合わせが得に優れていることが明らかとなった。DD-システム系の欠陥を補完するために計画を余儀なく変更するに至り、当初の予定に遅れることとなったが、結果的には目的の達成が期待できる新たなタンパク発現誘導ベクター系の構築に成功した。今後、他の研究資金により研究を継続し、本研究において得られた成果を生かすことで、当初の計画を完遂する予定である。
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[Journal Article] Frequent pathway mutations of splicing machinery in myelodysplasia2011
Author(s)
Yoshida K, Sanada M, Shiraishi Y, Nowak D, Nagata Y, Yamamoto R, Sato Y, Sato-Otsubo A, Kon A, Nagasaki M, Chalkidis G, Suzuki Y, Shiosaka M, Kawahata R, Yamaguchi T, Otsu M, Obara N, Sakata-Yanagimoto M, Ishiyama K, Mori H, Nolte F, Hofmann WK, Miyawaki S, Sugano S, Haferlach C, Koeffler HP, Shih LY, Haferlach T, Chiba S, Nakauchi H, Miyano S, Ogawa S
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Journal Title
Nature
Volume: 478
Pages: 64-69
Peer Reviewed
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[Journal Article] Heterozygous ITGA2B R995W mutation inducing constitutive activation of the alphaIIbbeta3 receptor affects proplatelet formation and causes congenital macrothrombocytopenia2011
Author(s)
Kunishima S, Kashiwagi H, Otsu M, Takayama N, Eto K, Onodera M, Miyajima Y, Takamatsu Y, Suzumiya J, Matsubara K, Tomiyama Y, Saito H
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Journal Title
Blood
Volume: 117
Pages: 5479-5484
Peer Reviewed
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