アデノ随伴ウイルスベクターに対する中和抗体測定法の改良と血友病遺伝子治療への展開

2011 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 21591248
• Research Institution: Jichi Medical University
• Principal Investigator: 水上 浩明 自治医科大学, 医学部, 准教授 (20311938)
• Keywords: 遺伝子 / ウイルス / バイオテクノロジー / 免疫学 / 遺伝子治療

Research Abstract

AAVベクターキャプシドに対する中和抗体の検出法の感度を向上させるため、関連する諸条件の検討を行った。このためには少ないベクター量で感染を成立させることが有益と考えられることから、感染の増強法につき検討した。その結果、感染に際して様々な糖類を培地に添加させることで感染効率の増強が認められることを見出した。また、用いるレポーター遺伝子と検出系の感度を最大にするべく、ルシフェラーゼ遺伝子などに関して検討を行ったところ、β-ガラクトシダーゼをONPGアッセイで検出する系が最も鋭敏であり、しかも結果の安定性及び再現性に優れていることが判明した。以上により、中和抗体検出系に関してはおおむね最適化が終了し、これまでの報告を大きく凌駕する感度の検査法を確立したと考えられた。過去の検査法で陰性と考えられた血清に関しても改良法で陽性となる例が散見されることから、本検査法は低力価陽性の個体を見出す上で有用と考えられる。爾後は実際の血清サンプルを対象にした測定を行った。医薬基盤研・霊長類研究センターにおけるカニクイザル血清試料を用いて測定した結果、大部分(76.8%及び69.5%)のサルが8及び9型に対して中和抗体陽性であった。このため、AAVベクターの血管内投与に基づく前臨床研究に際しては、用いるサルの選別が重要と考えられる。今後はヒトにおける中和抗体陽性率に関して、健常人並びに血友病などの患者を対象として陽性率の検討を行う予定である。

Research Products

• [Journal Article] Recovery of neurogenic amines in phenylketonuria mice following liver-targeted gene therapy (2012)
  • Author(s): Yagi, H., Sanechika, S., Ichinose, H., Sumi-Ichinose, C., Mizukami, H., Urabe, M., Ozawa, K., Kume, A.
  • Journal Title: Neuroreport Volume: 23 Pages: 30-4
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Development of a mouse model for lymph node metastasis with endometrial cancer (2011)
  • Author(s): Takahashi, K., Saga, Y., Mizukami, H., Takei, Y., Urabe, M., Kume, A., Suzuki, M., Ozawa, K.
  • Journal Title: Cancer Sci Volume: 102 Pages: 2272-7
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Interleukin-10 expression induced by adeno-associated virus vector suppresses proteinuria in Zucker obese rats
  • Author(s): Ogura M
  • Journal Title: Gene Ther Volume: (in press)
  • DOI: 10.1038/gt.2011.183
  • Peer Reviewed
• [Presentation] Optimization of efficacy in AAV-mediated siRNA expression (2011)
  • Author(s): Mizukami H, et al
  • Organizer: 19^<th> Annual Congress of the European Society of Gene and Cell Therapy
  • Place of Presentation: Brighton, UK
  • Year and Date: 2011-10-29
• [Presentation] Consistent Factor IX Expression in NAb-negative Macaques following IV Administration of AAV8 Vector (2011)
  • Author(s): Mizukami H, et al
  • Organizer: 第73回日本血液学会学術集会
  • Place of Presentation: 名古屋
  • Year and Date: 2011-10-14
• [Presentation] Relationship between neutralizing antibody and factor IX expression in non-human primates following IV administration of AAV8 vectors (2011)
  • Author(s): Mizukami H, et al
  • Organizer: American Society of Gene Therapy 14th Annual Meeting
  • Place of Presentation: Seattle, USA
  • Year and Date: 2011-05-21
• [Book] Gene Therapy for Diabetic Retinopathy in Animal Models and Humans. In, The Open Diabetes Journal-Novel rat model of diabetes, SDT rat and SDT fatty rat.(ed.By Kahehashi, A.) (2011)
  • Author(s): Mizukami H, et al
  • Total Pages: 122
  • Publisher: Bentham