組織特異的遺伝子改変マウスを用いた皮膚腫瘍形成における膜型上皮細胞成長因子の解析

2009 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 21591434
• Research Institution: Ehime University
• Principal Investigator: 白方 裕司 Ehime University, 大学院・医学系研究科, 講師 (50226320)
• Keywords: 遺伝子改変 / マウス / HB-EGF / EGFR / carcinogenesis / テトラサイクリン / トランス活性化 / shedding阻害

Research Abstract

表皮の増殖・分化は多くの細胞成長因子により制御されており、最も重要なものはEGFファミリーである。我々が作製した表皮特異的HB-EGFノックアウトマウスは、外見は正常であるが創傷治癒が遅延し、HB-EGFは創傷治癒機転の早期に誘導されることを見いだした。皮膚悪性腫瘍形成においてもHB-EGFが重要な働きをしているのではないかと考え、化学発癌と紫外線発癌におけるHB-EGFの役割について明らかにすることを目的とした。本年度はlox-HB-EGFホモマウスとケラチン5プロモーターで発現するcre発現マウスとの交配を繰り返すことにより表皮特異的HB-EGFノックアウトマウス:HB-EGF KOを作製した。テトラサイクリン誘導型表皮特異的HB-EGFTGマウスは2種類、遊離型HB-EGFを発現するマウスと、膜型HB-EGF(酵素により遊離型に切断されない変異体)を発現するマウスを作製しC57/BI6マウスと交配を繰り返した。表皮特異的に発現誘導させるため、K5TetOnTGマウスを作製し、これも増殖させた。これらのマウスを交配し増殖させている。現在までの所明かな皮膚の表現型は見られていない。次年度はドキシサイクリンを投与することにより、マウス表皮にてHB-EGFを発現誘導させ、表現型について観察する。ヒト表皮角化細胞を無血清培養にて培養し、細胞密度が90%に達した時点でTPAを培養液に添加し、経時的に培養液を回収し、同時に細胞を溶解し、細胞抽出液を抽出した。培養液中に遊離されたHB-EGFをバイオアッセイを用いて定量し、細胞抽出液を用いてウエスタンブロット法にてEGF受容体の活性化を抗リン酸化EGF受容体抗体を用いて検出した。その結果、TPAによるHB-EGFの膜型から遊離型への変換が表皮角化細胞においてなされていることを確認した。

Research Products

• [Journal Article] Diagnosis and treatment of Stevens-Johnson syndrome and toxic epidermal necrolysis with ocular complications (2009)
  • Author(s): Sotozono C, Ueta M, Koizumi N, Inatomi T, Shirakata Y, Ikezawa Z, Hashimoto K, Kinoshita S.
  • Journal Title: Ophthalmology 116 Pages: 685-90
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] The influence of hepatic damage on serum soluble Fas ligand levels of patients with drug rashes (2009)
  • Author(s): Tohyama M, Shirakata Y, Sayama K, Hashimoto K
  • Journal Title: J Allergy Clin Immunol 123 Pages: 971-2
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Alteration of TLR3 pathways by glucocorticoids may be responsible for immunosusceptibility of human corneal epithelial cells to viral infections (2009)
  • Author(s): Hara Y, Shiraishi A, Kobayashi T, Kadota Y, Shirakata Y, Hashimoto K, Ohashi Y
  • Journal Title: Mol Vis 15 Pages: 937-48
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] IL-17 and IL-22 mediate IL-20 subfamily cytokine production in cultured keratinocytesvia increased IL-22 receptor expression (2009)
  • Author(s): Tohyama M, Hanakawa Y, Shinakata Y, Dai X, Yang L, Hirakawa S, Tokumaru S, Okazaki H, Sayama K, Hashimoto K
  • Journal Title: Eur J Immunol 39 Pages: 2279-88
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Living Skin Equivalents Constructed Using Human Amnions as a Matrix (2009)
  • Author(s): Yang L, Shirakata Y, Tokumaru S, Xiuju D, Tohyama M, Hanakawu Y, Hirakawa S, Sayama K, Hashimoto K
  • Journal Title: J Dermatol Sci 56 Pages: 188-95
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Nodal Lymphangiogenesis and Metastasis : Role of Tumor-Induced Lymphatic Vessel Activation in Extramammary Paget's Disease (2009)
  • Author(s): Hirakawa S, Shirakata Y, 他
  • Journal Title: Am J Pathol 175 Pages: 2235-48
  • Peer Reviewed
• [Presentation] Simple method of constructing living skin equivalent using human amnionas dermal matrix (2009)
  • Author(s): Shirakata Y, Yang L, Sayama K, Hashimoto K
  • Organizer: The 39^<th> Annual Meeting of European Society for Dermatological Research
  • Place of Presentation: Budapest, Hungary
  • Year and Date: 20091209-20091210
• [Presentation] Development of a new skin equivalent using de-epithelialized amnion membrane (2009)
  • Author(s): Shirakata Y, Hashimoto K
  • Organizer: The 4^<th> Joint Meeting of Japanese Dermatological Association and Australasian College of Dermatolog
  • Place of Presentation: Sapporo
  • Year and Date: 20091207-20091210
• [Presentation] Inflammatory mediator TAK1 regulates hair follicle cycling (2009)
  • Author(s): Sayama K, Shirakata Y, Ishimatsu-Tsuji Y, Kajiya K, Hirakawa S, Sugawara K, Chambon P, Akira S, Paus R, Kishimoto J, and Hashimoto K
  • Organizer: The 69^<th> Annual Meeting of Society for Investigative Dermatology
  • Place of Presentation: Montreal, Canada
  • Year and Date: 20090506-09