2009 Fiscal Year Annual Research Report
肝移植における非侵襲的グラフト病態診断法の確立とリアルタイム免疫応答モニタリング
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21591637
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
丸橋 繁 Osaka University, 医学系研究科, 助教 (20362725)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
永野 浩昭 大阪大学, 医学系研究科, 准教授 (10294050)
武田 裕 大阪大学, 医学系研究科, 助教 (90397696)
小林 省吾 大阪大学, 医学系研究科, 助教 (30452436)
種村 匡弘 大阪大学, 医学系研究科, 助教 (30379250)
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| Keywords | 肝移植 / 生体材料 / 拒絶反応 / DNAマイクロアレイ / プロテオーム解析 |
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| Research Abstract |
マイアミ大学、当院で施行した肝移植患者、肝部分提供者を対象とし、肝移植患者においては、術前の末梢血、術後の末梢血、胆汁、尿をプロトコールに従い無菌操作で採取し、保存した。肝生検は肝提供者の術中肝生検、および肝移植患者の術後肝生検を対象とした.
(1) DNAマイクロアレイ:ヒトの全遺伝子を網羅した44000遺伝子が搭載されたDNAマイクロアレイチップを用いて発現量測定を行った.マイアミ大学で得られたHCV肝炎再発患者13名と拒絶反応陽性患者9名の肝生検サンプルの比較により、拒絶反応の候補遺伝子として、Caspase 8、 Guanylate-binding protein 2(BMP2)を同定した。さらにBMP2に関して、肝移植における末梢血中mRNAの推移を測定し、拒絶反応時に上昇することを示した。実際の臨床応用が可能となり、今後の研究が期待される。
(2) プロテオーム解析:保存胆汁および尿を用いて、胆汁や尿に含まれる様々な共雑物(胆汁酸、脂質、ビリルビン等の分析の妨げになる物質)を効率よく除去する方法を確立する.さらに高効率で消化ペプチドを抽出、回収しナノフロー逆相高速液体クロマトグラフィー(RP-HPLC)にて分離精製する方法を確立した。酸素同位体法を用いた蛋白変動解析の結果から、拒絶反応に関連する候補蛋白としてAlanin amniopeptidase(AAP)を同定した。今後胆汁中のMP量を測定することで、急性拒絶反応の診断を行うことが可能であるかどうかを検討する。AAPは酵素であり、酵素活性を測定するELIZA法で簡便にAAP量を測定できることから、臨床応用の有用性が期待される。
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