2010 Fiscal Year Annual Research Report
免疫機構を応用した癌リンパ節微小転移の制御に関する基礎的・臨床的研究
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21591707
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| Research Institution | Kagoshima University |
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Principal Investigator |
石神 純也 鹿児島大学, 医学部・歯学部附属病院, 講師 (90325803)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
北薗 正樹 鹿児島大学, 医学部・歯学部附属病院, 助教 (30398276)
中条 哲浩 鹿児島大学, 医学部・歯学部附属病院, 助教 (20404486)
夏越 祥次 鹿児島大学, 医歯学総合研究科, 教授 (70237577)
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| Keywords | リンパ節転移 / 抗腫瘍免疫寄稿 / リンパ節転移モデル / ケモカイン |
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| Research Abstract |
各種癌はリンパ節転移を伴うことが知られており、リンパ節郭清を併施している。リンパ節転移の中にも微小な転移が存在し、微小転移陽性症例の予後が不良なこと、腫瘍から産生されるケモカインによりリンパ管内を腫瘍が遊走しやすくなり、易転移の状況が形成されることが知られている。一方、多数の微小転移の形成が各種手技により報告されているが、その微小転移巣が必ずしも臨床上、顕性化しないことが予想される。我々はリンパ節微小転移モデルを作成し、微小転移の動向を基礎的・臨床的に観察し、抗腫瘍免疫の観点から考察を行う。具体的には以上の3つの大項目で行っている。
A.所属リンパ節内微小転移の検出と腫瘍ケモカインの発現
腫瘍ケモカインの評価は免疫組織学的に行った。すなわち、当教室で根治切除された消化器癌症例のうち、長期予後が判明している症例を対象とした。腫瘍最大割面のパラフィン切片を脱パラしたのち、CCR7、CXCR4を1次抗体に反応させ、ABC法で可視化した。ケモカインの発現の評価は以前の論文に従い行った。
上部消化器癌手術時にサイトケラチンを用いた免疫染色法やCEAmRNAによる定量PCRにて検索を行った。
微小転移の検出も同様に免疫組織学的に行った。郭清されたリンパ節を薄切し、抗サイトケラチン抗体を希釈し反応させ、サイトケラチン陽性の細胞を微小転移陽性症例と評価した。ケモカイン陽性症例とリンパ節微小転移陽性症例の相関を統計学的に解析する。また、ケモカイン陽性症例のリンパ節転移以外の臨床病理学的因子(壁深達度、脈管侵襲、組織型、腫瘍長径 再発)との関連性を統計学的に解析した。
B.センチネル・非センチネルリンパ節の抗腫瘍免疫能の検討
リンパ節リンパ球を分離し、DMSO含有高濃度FBSに浮遊させ、液体窒素に保存する。
保存リンパ球を取り出し、抗原刺激にてサイトカインを産生させ、細胞内のサイトカイン量を3カラーのフローサイトメーターで検出し、Th1/Th2およびTc1/Tc2バランスを測定した。
リンパ節内の液性の抗腫瘍サイトカイン(IFNγ、IL-12)、免疫抑制サイトカイン(TGFβ、IL-4)の測定をELISAで行い、液性サイトカインの定量を行った。センチネルリンパ節と非センチネルリンパ節での細胞内サイトカイン産生能の比較を行い、統計学的な差異を検討した。
C.リンパ節微小転移形成マウスを用いた微小転移の動向に関する検討
マウスメラノーマ細胞であるB17F1にリポフェクチン法でGFPを導入した。マワス足底に腫瘍を摂取し、膝窩の所属リンパ節にリンパ節転移を形成した。このセルラインはリンパ節転移を形成するが肺や肝臓など遠隔に転移が形成されないことを確認した。
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