2009 Fiscal Year Annual Research Report
iPS細胞由来アストロサイトの選択的分化誘導と脊髄損傷急性期治療への応用
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21591892
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| Research Institution | Chiba University |
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Principal Investigator |
村田 淳 Chiba University, 医学部附属病院, 准教授 (20344997)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
山崎 正志 千葉大学, 大学院・医学研究院, 准教授 (50281712)
大河 昭彦 千葉大学, 医学部附属病院, 講師 (30312945)
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| Keywords | 脊髄損傷 / iPS細胞 / NSS法 / astrocyte / ACM |
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| Research Abstract |
【目的】(1)Neural Stem Sphere(NSS)法はES細胞より効率よく神経幹細胞を分化誘導できる。(2)Astrocyteが炎症の波及を防ぐ、再生軸索のガイダンスとなる、という脊髄損傷に対する有益面に関する報告も増えている。本実験の目的は、iPS細胞よりNSS法を用いて分化誘導したAstrocyteをラット脊髄損傷モデルに移植し、その効果を検討することである。
【方法】8週齢雌SDラットの脊髄損傷3日後に、10万個/5μ1のiPS細胞由来Astrocyteを髄注したものをAstrocyte移植群(N=20)、DMEMを髄注たものをDMEM群(N=10)とした。移植する寸前にPKH26Red処理を行いマーカーとした。
下肢運動機能評価として、BBB scoreを、Inclined plane test、SCANETを行った。アロディーニアの評価として、損傷8週時にThermal hyperalgesia test(熱刺激)と、Mechanical allodynia test(圧刺激)を行い、非脊髄損傷ラット(N=5)も加えて検討した。組織学的検討として残存髄鞘量、GFAP陽性面積、CGRP陽性面積を計測した。
(2)脊髄損傷後7日後に、Astrocyte移植群(N=9)、DMEM群(N=7)とした同様な実験をおこなっている。
【結果】(1)3日後移植:下肢運動機能評価に両群で有意差はなかった。Astrocyte移植群はノーマル群に比し有意に熱刺激に過敏であり、ノーマル群とDMEM群に比して有意に圧刺激に過敏であった。移植細胞は移植後8週の特点で生存していたが、GFAPの染色性が陰性となっていた。組織学的検討では、全ての項目で両群間に有意差はなかった。
(2)7日後移植:下肢運動機能ならびに熱刺激・圧刺激において両群間に有意差はなかった。現在組織学的検討を行っている。
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