2009 Fiscal Year Annual Research Report
難治性疼痛に対する生体モルヒネ遺伝子導入に関する研究
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21591906
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| Research Institution | Teikyo University |
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Principal Investigator |
男澤 朝行 Teikyo University, 医学部, 講師 (60375706)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
豊根 知明 帝京大学, 医学部, 教授 (10407918)
大鳥 精司 千葉大学, 医学部付属病院, 助教 (40361430)
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| Keywords | 内因性オピオイド / 難治性疼痛 / 体外衝撃波 / 遺伝子導入 / 神経因性疼痛モデル / βエンドルフィン / POMC |
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| Research Abstract |
モルヒネは強力な鎮痛作用を持つ一方、実際の臨床では呼吸抑制や依存性、耐性、便秘などの副作用が問題となる。脳内モルヒネとよばれる内因性オピオイドであるβエンドルフィンは強力な鎮痛作用を持ち副作用は全く無いが、代謝が早いため臨床応用されていない。そこで、βエンドルフィンの前駆体proopiomelanocortin(POMC)を体外衝撃波(RSW)を用いて遺伝子導入することにより、長期間にわたり副作用なく強力な鎮痛作用を得ることを目的とした。in vitroでSDラット筋由来の培養細胞を作り、POMCを添加し放射状体外衝撃波(RSW)照射により遺伝子導入を行い、安全に遺伝子導入が可能であることと有効な照射条件を調査した。in vivoでは、炎症性疼痛モデルとしてラット足背にComplete Freund's Adjuvant(CEA)を皮下注、神経因性疼痛モデルとしてchronic constriction injury model(CCI)を用い坐骨神経部分損傷を作成した。POMCはラットcDNAライブラリーより目的とするPOMC遺伝子を作成しプラスミドのインサートの配列をシーケンスにより配列を確認し、これをグリセロールストックとして保存した。pAP-tagベクターを使用し培養、QIAfilter plasmid kitを使用し精製した。POMC群としてはモデル作成後、左腓腹筋にPOMC100μgを筋注、同部位にRSWを照射し遺伝子導入を行った。von Frey testとcat walkを用いて行動学的評価を行った。心臓血採血により血液中エンドルフィン濃度をELISA法を用いて定量し、さらに灌流固定ののち後根神経節と脊髄腰膨大部、導入局所の筋線維を採取、疼痛ペプチドのマーカーCGRP・IB4、βエンドルフィンで免疫組織化学染色を行った。また、飲水量、食事量、排便量を測定し、副作用の有無を調べた。RSWを使用しPOMCを遺伝子導入することにより、局所にβエンドルフィンが発現し、ラットの疼痛行動が抑制された。後根神経節でのCGRP陽性細胞は有意に減少した。POMCの遺伝子導入により、長期間にわたり副作用なく強力な鎮痛作用が得られる可能性が示唆され、今後の難治性慢性疼痛の新たな治療法となりうると考えられた。
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[Journal Article] Transfection of Rat Cells With Proopiomeranocortin Gene, Precursor of Endogenous Endorphin, Using Radial Shock Waves Suppresses Inflammatory Pain2009
Author(s)
Masaomi Yamashita, Kazuyo Yamauchi, Munetaka Suzuki, Yawara Eguchi, Sumihisa Orita, Mitsuharu Endo, Toshihide Yamashita, Kazuhisa Takahashi, Seiji Ohtori
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Journal Title
SPINE 14
Pages: 2270-2277
Peer Reviewed
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