2009 Fiscal Year Annual Research Report
莢膜細胞特異的マイクロRNAの機能解析:卵胞の転写後調節とPCOSでの役割解明
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21592115
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| Research Institution | Nippon Medical School |
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Principal Investigator |
瀧澤 敬美 Nippon Medical School, 医学部, 助教 (40386157)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
石橋 宰 日本医科大学, 医学部, 講師 (70293214)
竹下 俊行 日本医科大学, 大学院・医学研究科, 教授 (60188175)
瀧澤 俊広 日本医科大学, 大学院・医学研究科, 教授 (90271220)
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| Keywords | 婦人科学 / 卵巣 / 莢膜細胞 / 多嚢胞性卵巣症候群 / microRNA |
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| Research Abstract |
本研究は、microRNA(miRNA)が卵胞莢膜細胞の機能制御を通して、卵胞成熟と排卵の調節の仕組みにどのように関わるのか、分子レベルでの機能解明を目指すとともに、多嚢胞性卵巣症候群の分子病態におけるmiRNAの関わり解明と臨床応用(新規バイオマーカー等)のための基盤研究を目指し研究を開始しました。莢膜細胞のmiRNAの発現プロファイル解析:マウス新生仔卵巣より莢膜細胞、莢膜幹細胞の分離を試みましたが、培養に必要な十分な細胞数を得るこが困難をきわめ、分離方法の検討の必要性が課題として残りました。卵胞莢膜細胞は卵巣内において非常に少量の細胞集団であり、卵胞莢膜細胞のmiRNA発現プロファイル解析を行うために、レーザーマイクロダイセクション法により卵巣組織標本切片から莢膜細胞層を回収、RNAを抽出し、プロファイル解析を行うことを試みました。先ず、レーザーマイクロダイセクション法により回収したサンプルから、安定してRNAを抽出し、miRNAの発現をreal-time PCRで検出できるよう、胎盤および卵巣組織標本を用いて詳細な条件検討を行いました。この検討により、少量の切片回収量であっても、RNA抽出前処理として行うproteinase K処理を12時間行うことにより、安定してmiRNA発現を検出することが可能であること、また、内因性のコントロールとして、MIR16、U6、U44等が有効であることを明らかにしました。さらに、パラフィン包埋した卵巣標本を用いて、レーザーマイクロダイセクション解析を進めています。
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