2011 Fiscal Year Annual Research Report
内耳疾患診断のバイオマーカーCTP -迅速検出法の開発と臨床応用-
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21592169
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| Research Institution | Saitama Medical University |
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Principal Investigator |
池園 哲郎 埼玉医科大学, 医学部, 教授 (80277491)
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| Keywords | 耳鼻科 / トランスレーショナルスタディ / 外リンパ瘻 |
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| Research Abstract |
1.前処理方法の最:適化
POCT(Point of Care Testing)でnative蛋白を検出することが目的である。今まで、抗体とCTP蛋白が「非還元状態で」反応するかどうかを検討してきたが、今回は適度な還元処理をおこなう新たな方法を選択した。還元剤として抗原抗体反応阻害しないマイルドな還元剤2-MEAを用いた場合、DTT+ヨードアセトアミド(IAA)を用いた場合の2種類を検討し、エライザ法による検討を行った。その結果、強い還元剤ジチオスレイトール(DTT)を用いてまずサンプルを前処理し、余剰還元力を打ち消す能力があるヨードアセトアミド(IAAを加えてからエライザを行う方法を検討した。その結果、Urea,NP40,DTTを用いた前処理を加えたヒト外リンパとヒト血清の間に十分な反応性の違いが見られた。これはNative CTP検出法の将来を開く画期的な結果である。
2.ELISA系の最適化
上記の結果を基に、抗CTPペプチド・ポリクローナル抗体12種類を、エライザプレートの固相、捕捉抗体としてそれぞれ使用し、CTPとの反応性をエライザ法で測定する。外リンパと、コントロールの溶血血液を比較して、反応性がもっとも高い組み合わせを検証する。本方法による豚外リンパでのエライザ構築の精度を検討し、ヒトサンプルの検討もおこなった。
3.ポジティブコントロールとしてのブタ外リンパの採取
現在我々はブタ頭蓋を屠畜場から購入し、手術用顕微鏡を用いて削開し、内耳から外リンパを採取している。現在のところ、モルモットなどの鶴齧類などでも検討を行っている。
4.同時並行でCTPの内耳発現特異性に関する分子生物学的研究
ラットなどの齧歯類などでも外リンパを採取し、外リンパ内のアイソフォーム発現に関して発生学的な検討をおこないそのユニークな発現パターンを解析した。
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[Presentation] CTP検査を用いた中耳真珠腫による内耳瘻孔深達度診断の工夫2011
Author(s)
杉峙一樹, 池園哲郎, 新藤晋, 松田帆, 小川洋, 堤内亮博, 平岩文, 和田伊佐雄, 柴崎修, 中嶋正人, 善浪弘善, 坂本圭, 加瀬康弘
Organizer
第21回日本耳科学会総会・学術講演会
Place of Presentation
沖縄宜野湾市コンベンションセンター
Year and Date
2011-11-26
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[Presentation] Usher症候群の全国アンケート調査結果とタイプ分類における課題2011
Author(s)
吉村豪兼, 岩崎聡, 西尾信哉, 工穣, 宇佐美真一, 熊川孝三, 東野哲也, 佐藤宏昭, 長井今日子, 武市紀人, 石川浩太郎, 池園哲郎, 内藤泰, 福島邦博, 君付隆, 中西啓
Organizer
第21回日本耳科学会総会・学術講演会
Place of Presentation
沖縄宜野湾市コンベンションセンター
Year and Date
2011-11-26
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[Presentation] 優性遺伝形式をとる遺伝性難聴に関する調査研究班報告2011
Author(s)
岩佐陽一郎, 岩崎聡, 西尾信哉, 工穣, 宇佐美真一, 熊川孝三, 東野哲也, 佐藤宏昭, 長井今日子, 武市紀人, 石川浩太郎, 池園哲郎, 内藤泰, 福島邦博
Organizer
第21回日本耳科学会総会・学術講演会
Place of Presentation
沖縄宜野湾市コンベンションセンター
Year and Date
2011-11-26
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