2009 Fiscal Year Annual Research Report
4NQO誘発ラット舌発癌モデルにおける遺伝子変異機構の解析
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21592570
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| Research Institution | Gifu University |
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Principal Investigator |
牧田 浩樹 Gifu University, 医学部附属病院, 講師 (50345790)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
加藤 恵三 岐阜大学, 医学部附属病院, 助教 (40397336)
山下 知巳 岐阜大学, 医学部附属病院, 講師 (80345793)
土井田 誠 岐阜大学, 大学院・医学系研究科, 准教授 (90313890)
柴田 敏之 岐阜大学, 大学院・医学系研究科, 教授 (50226172)
米本 和弘 岐阜大学, 医学部附属病院, 助教 (80422731)
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| Keywords | ラット / 4NQO / 発癌 / メチル化 / 舌 |
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| Research Abstract |
本研究は4NQO誘発ラット舌発癌モデルを用いて、4NQO投与早期(病変発症前)から前癌病変(軽度異型粘膜～高度異型粘膜)、癌(早期癌、浸潤癌)までの組織を採取し、現在までにヒト口腔癌でDNAメチル化異常が報告されているさまざまな癌抑制遺伝子のプロモーター領域のDNAメチル化異常の程度や頻度を詳細に解析し、病変の進行過程とDNAメチル化異常の関係について明らかにすることを目的とした。
・メチル化特異的PCR(MSP)法によるDNAメチル化異常の解析
経時的、部位別に採取したラットの舌組織(正常粘膜から前癌病変、癌)からDNAを抽出し、バイスルファイト処理後、p16癌抑制遺伝子のメチル化をMSP法にて評価・検討した。4NQO投与開始から12週までの検体では、p16のメチル化は検出されなかった。しかし、20週以降では舌背後方部の上皮(正常上皮、異型上皮、癌)においてメチル化が検出された。扁平上皮癌においては、より明らかなp16のメチル化が検出された。また、20週以降では癌の発生が少ない舌前方部の正常粘膜においてもメチル化を検出したものを認めた。同様なMSPによる解析において、癌抑制遺伝子であるMLH1、E-cadherin、Rassf1Aではすべての病変にメチル化を認めなかった。この結果から、4NQO誘発ラット舌発癌モデルでは、p16のメチル化が大きく関与しており、それは比較的早期の正常粘膜から前がん状態に生じていることが明らかになった。
・今後の研究について
今後、MSP法に加え、リアルタイムMSPやバイスルファイトシークエンシングによる詳細なDNAメチル化異常の解析を行う予定である。また、他の遺伝子(p15、APC、MGMT、RARbetaなど)のDNAメチル化異常の解析も行っていく予定である。
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