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2009 Fiscal Year Annual Research Report

接合上皮細胞の遺伝子発現の網羅的解析と特異的マーカーの検索

Research Project

Project/Area Number 21592634
Research InstitutionShowa University

Principal Investigator

山本 松男  Showa University, 歯学部, 教授 (50332896)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 山本 剛  昭和大学, 歯学部, 助教 (80384189)
臼井 通彦  昭和大学, 歯学部, 助教 (10453630)
Keywords歯周病 / 網羅的遺伝子解析 / 接合上皮 / レーザーダイセクション
Research Abstract

本研究の目的は、歯周病病変の初期に破壊の進む上皮性付着機構に着目し、それを担う接合上皮細胞の遺伝子発現の網羅的解析、特異的マーカーの検索を通して上皮付着のメカニズムを分子レベルで理解することである。これまで特異的マーカーも株化細胞も樹立されていなかったが、レーザーマイクロダイセクション法を応用することで克服する。
5週齢までのJc1:ICRマウス頭部を凍結薄切(前頭断)の後、接合上皮部分に含まれる細胞群をレーザーダイセクション法によって分離する手法を確立した。凍結切片においても樹脂包埋と同様に硬組織と軟組織の連続性を保った状態で切片を作成することが可能となった。標的組織である接合上皮・口腔上皮のみをレーザーマイクロダイセクション(ML)を用いて回収し、RNA抽出を行った。MLを用いて回収した接合上皮、口腔上皮のRNAサンプルにおいて18S,28SrRNAのピークが明瞭に検出され、低分子量の分解産物は微量であった。さらに、分離した細胞群より全RNAを抽出し、マイクロアレイによる発現遺伝子の網羅的解析に成功した。接合上皮においてCDK (p21,p15)、actin、α-cateninの発現が接合上皮で上昇していることが確認された。さらに抗好中球エラスターゼ作用を持つと知られている分泌型白血球プロテアーゼインヒビター(slpi)についても発現量の増加が認められた。接合上皮においてslpiの発現は口腔上皮に比べ約1000倍高い。口腔上皮に比較しで接合上皮に特異的な発現動態を示す遺伝子についてreal time PCR法による発現の定量的解析を行ったところ、接合上皮においてSlpiの発現は口腔上皮に比べ約1000倍高いことが明らかとなった。また、6週齢の切片上で、免疫染色を行い陽性を確認している。
バックグランドの発色が高いために、より正確な陽性部位の局在を明らかにするように継続している。

  • Research Products

    (5 results)

All 2009

All Journal Article (1 results) (of which Peer Reviewed: 1 results) Presentation (4 results)

  • [Journal Article] Docosahexaenoic acid induces adipose differentiation-related protein through activation of retinoid X receptor in human choriocarcinoma BeWo cells2009

    • Author(s)
      Suzuki K, Yamamoto M, Itabe H, 他3名
    • Journal Title

      Biological and Pharmaceutical Bulletin 32

      Pages: 1177-82

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] リゾリン脂質・LPA(lysophosphatidic acid)の破骨細胞前駆細胞株Raw264.7に対する影響2009

    • Author(s)
      臼井通彦, 宮園あがさ, 山本松男
    • Organizer
      第46回日本口腔組織培養学会学術大会
    • Place of Presentation
      東京
    • Year and Date
      2009-12-05
  • [Presentation] エナメル芽細胞における Caspase-14の役割2009

    • Author(s)
      宮園あがさ, 須澤徹夫, 山本松男, 上條竜太郎
    • Organizer
      第51回歯科基礎医学会学術大会・総会
    • Place of Presentation
      新潟
    • Year and Date
      2009-09-11
  • [Presentation] Naringenin は黄色ブドウ球菌のTLR2を介した炎症応答を抑制する2009

    • Author(s)
      島田絵里, 片岡嗣雄, 福羅勝久, 柴田健一郎, 山本松男, 五十嵐武
    • Organizer
      第83回日本細菌学会総会
    • Place of Presentation
      横浜
    • Year and Date
      2009-03-27
  • [Presentation] Streptococcus mutans の貪食抵抗性におけるリポ蛋白質PPiAの役割2009

    • Author(s)
      向原正, 有本隆文, 谷口誠, 高橋真和, 山本松男, 五十嵐武
    • Organizer
      第83回日本細菌学会総会
    • Place of Presentation
      横浜
    • Year and Date
      2009-03-27

URL: 

Published: 2011-06-16   Modified: 2016-04-21  

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