2009 Fiscal Year Annual Research Report
ドメインシャッフリングによるムタナーゼキメラ酵素の作製とバイオフィルムの分解
| Project/Area Number |
21592669
|
|---|
| Research Institution | Tsurumi University |
|---|
Principal Investigator |
今井 奨 Tsurumi University, 歯学部, 講師 (80072958)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
花田 信弘 鶴見大学, 歯学部, 教授 (70180916)
野村 義明 鶴見大学, 歯学部, 准教授 (90350587)
|
|---|
| Keywords | バイオフィルム / デキストラナーゼ / ムタナーゼ / キメラ酵素 / ドメインシャッフリング |
|---|
| Research Abstract |
S.mutans UA 159からDNAを抽出し、PCRによりdextranase Aおよびdextranase B遺伝子を増幅した。これらの遺伝子を一旦pUC plasmidにクローニングした後、発現ベクターであるpQE vector(QIAGEN)にサブクローニングした。このpQEベクターにはHis tagが付与されている。Dex A、Dex Bそれぞれを大腸菌にトランスフォーメーションを行い、IPTGで発現誘導を行うとともにHis tagを利用して精製を行った。His tagによる精製は成功し、ポリアクリルアミド電気泳動によりシングルバンドであることを確認した。
Dex AおよびDex Bを導入した形質転換大腸菌を培養し、菌体を遠心分離により集菌した。破砕機にて菌体を分解したのち、遠心分離上清を集め、素酵素標品とした。
素酵素標品中のDextranase活性は市販デキストランを基質としてSomogyi-Nelson法にて測定した。その結果、dextranase Aの活性は明らかに確認できた。しかし、dextranase Bの活性は確認できなかった。今後はdextranase B遺伝子の効率的な導入と、さらに非水溶性グルカンの主要な結合であるα1,3-結合を分解するムタナーゼ遺伝子の導入を検討する予定である。
|
