2009 Fiscal Year Annual Research Report
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21658115
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
難波 成任 The University of Tokyo, 大学院・農学生命科学研究科, 教授 (50189221)
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| Keywords | ファイトプラズマ / プラスミド / 形質転換 |
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| Research Abstract |
ファイトプラズマ(Phytoplasma属細菌)は、700種以上の植物に感染し、世界中で多くの農作物に被害を与えているが、難培養性であるため研究が困難であり、防除法も確立していない。本研究は、ファイトプラズマの培養系・形質転換系の確立に向けた基盤を構築することを目的としている。申請者の過去の研究により、OY系統のファイトプラズマが有する全ての染色体外DNAがクローン化され、塩基配列が解読されている。本研究ではこれらの染色体外DNAをシャトルベクターに利用する予定であるが、マーカー遺伝子等をファイトプラズマ内で発現させるためには、染色体外DNA上で機能するプロモーターを特定する必要がある。そこで、RT-PCRや5'-RACE等の手法を用いて、染色体外DNAにコードされる各遺伝子のプロモーターの同定を目指した。Ca.Phytoplasma asteris, OY strainの昆虫伝搬能喪失株(OY-NIM)では、プラスミドpOYNIM上のORF3遺伝子が欠失しており、またOY-NIM感染植物ではORF3タンパク質の発現が認められないことから、昆虫伝搬能とORF3との関連性が推測されている。しかし、OY-NIMの別のプラスミドEcOYNIM上にORF3がコードされており、この遺伝子が発現しない原因はこれまで不明であった。そこで、OYの弱毒株(OY-M)が持つプラスミドEcOYMにおけるORF3の転写開始点の特定し、そのプロモーター領域を解析した。まず、OY-M感染昆虫のRNAを用いてORF3の5'-RACEを行ったところ、OY-MのORF3は2つの転写開始点を持つことが明らかとなった。次に、ORF3の各転写開始点におけるプロモーターを推測し、EcOYNIMにその保存配列が存在するか調べたところ、EcOYNIMでは2つのプロモーターのうち1つは配列が変異し、1つは欠落していた。以上より、OY-NIMのORF3は、遺伝子の欠失及びプロモーターの機能欠損により発現不能になったと考えられた。
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[Journal Article] In the non-insect-transmissible line of onion yellows phytoplasma(OY-NIM), the plasmid-encoded transmembrane protein ORF3 lacks the major promoter2009
Author(s)
Ishii, Y., Kakizawa, S., Hoshi, A., Maejima, K., Kagiwada, S., Yamaji, Y., Oshima K, Namba S.
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Journal Title
Microbiology-(UK) 155
Pages: 2058-2067
Peer Reviewed
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[Journal Article] Process of reductive evolution during 10 years in plasmids of a non-insect-transmissible phytoplasma.2009
Author(s)
Ishii, Y., Oshima, K., Kakizawa, S., Hoshi, A., Maejima, K., Kagiwada, S., Yamaji, Y., Namba S.
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Journal Title
Peer Reviewed
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[Journal Article] A unique virulence factor for proliferation and dwarfism in plants identified from a phytopathogenic bacterium.2009
Author(s)
Hoshi, A., Oshima, K., Kakizawa, S., Ishii, Y., Ozeki, J., Hashimoto, M., Komatsu, K., Kagiwada, S., Yamaji, Y.
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Journal Title
Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A. 106
Pages: 6146-6421
Peer Reviewed
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[Journal Article] Cloning of immunodominant membrane protein genes of phytoplasmas and their in planta expression.2009
Author(s)
Kakizawa, S., Oshima, K., Ishii, Y., Hoshi, A., Maejima, K., Jung, H.Y., Yamaji, Y., Namba, S.
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Journal Title
FEMS Microbiol.Lett. 293
Pages: 92-101
Peer Reviewed
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[Presentation] Variability of immunodominant membrane proteins and host specificity of phyt〓2009
Author(s)
Kakizawa, S., Ishii, Y., Hoshi, A., Jung, H.Y., Oshima, K., N〓, S
Organizer
4th Meeting of the Asian Organization for Mycoplasmology
Place of Presentation
Animal Health Research Institute, Danshui, Taipei
Year and Date
2009-11-02
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