乳汁に含まれる膜小胞含有RNAの生物学的機能の解明

2010 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 21658117
• Research Institution: Mie University
• Principal Investigator: 青木 直人 三重大学, 大学院・生物資源学研究科, 准教授 (40242846)
• Keywords: 乳汁 / 乳腺 / 膜小胞 / RNA / microRNA

Research Abstract

マンモソームを介した細胞間での遺伝子のやり取りの可能性を探るために,ウシマンモソームを培養下のNIH-3T3繊維芽細胞に添加して一定期間インキュベートした。細胞を十分洗浄後,RNAを抽出し,乳汁関連遺伝子(αs1-casein,αs2-casein,β-casein,β-lactoglobulin)に対する特異プライマーを用いてRT-PCRを実施した。調べたいずれのRNAも増幅されたことから,マンモソームを介して細胞への遺伝子移入の可能性が強く示唆された。また消化管内での取り込みを想定し,乳汁を酸性条件下で一定期間インキュベートした後,超遠心分離法によりマンモソームを調製し,引き続いてRNAを調製したところ,未処理サンプルと同程度のRNAが抽出された。さらに含まれるmRNA(αs1-casein,β-casein,β-lactoglobulin)およびmiRNA(miR-93,miR-101,miR-150)量をリアルタイム定量RT-PCR法あるいは半定量的RT-PCR法により測定したところ,酸処理と未処理群間で有意な差が認められなかったことから,マンモソームは腸管内でも比較的安定に存在出来る可能性が強く示唆された。
またマンモソームに内包されるmRNAのうちαs1-casein,β-caseinはin vitroで翻訳されることも併せて明らかとなった。さらに予備的実験ながら,MFG-E8ノックアウトマウスの乳汁には野生型マウスと同程度のマンモソームRNAが含まれることも明らかとなった。

Research Products

• [Journal Article] Isolation of bovine milk-derived microvesicles carrying mRNAs and microRNAs (2010)
  • Author(s): Hata, T., Murakami, K., Nakatani, H., Yamamoto, Y., Matsuda, T., Aoki, N.
  • Journal Title: Biochemical and Biophysical Research Communications Volume: 396 Pages: 528-533
  • Peer Reviewed
• [Presentation] ウシ乳汁にはRNAを内包する膜小胞が存在し, RNA輸送媒体として機能しうる (2010)
  • Author(s): 長崎はるか, 秦健敏, 村上耕介, 中谷肇, 山本泰也, 松田幹, 青木直人
  • Organizer: 日本農芸化学会中部支部例会
  • Place of Presentation: 名古屋大学(名古屋市)
  • Year and Date: 2010-10-30
• [Presentation] ウシ乳汁にはRNAを含む膜小胞が存在する (2010)
  • Author(s): 秦健敏, 長崎はるか, 村上耕介, 中谷肇, 山本泰也, 松田幹, 青木直人
  • Organizer: 日本酪農科学シンポジウム
  • Place of Presentation: 共立女子大学(東京都)
  • Year and Date: 2010-08-20