染色体DNA標的部位のin vivo配列改変技術

2010 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 21659015
• Research Institution: Ehime University
• Principal Investigator: 紙谷 浩之 愛媛大学, 大学院・理工学研究科, 教授 (10204629)
• Keywords: 配列改変 / 染色体DNA / 遺伝子修復

Research Abstract

Tailed duplexesによる一塩基フレームシフト変異の修復:
研究代表者の以前の研究により、一塩基置換変異の修復(TGA配列のTCA配列への修復)においては、一本鎖DNAの3'-末端付近にオリゴヌクレオチドをアニールさせて作製した5'-tailed duplex、一本鎖DNAの5'-末端付近にオリゴヌクレオチドをアニールさせて作製した3'-tailed duplex、及び、一本鎖DNAの3種を比較した場合、5'-tailed duplex>3'-tailed duplex>一本鎖DNAの順に効率が高いことが明らかにされている。そこで、tailed duplexesの一塩基挿入変異や一塩基欠失変異の修復効率を培養細胞を用いて調べた。標的遺伝子は、一塩基フレームシフト変異を有するHyg-EGFP(ハイグロマイシン耐性遺伝子とEGFP遺伝子の融合遺伝子)遺伝子を用いた(TCGA、TA配列のTCA配列への修復)。その結果、tailed duplexesは挿入変異・欠失変異を修復できること、及び、tailed duplexesの方が一本鎖DNAよりも両変異の修復効率が高い傾向にあることを明らかとした。しかし、一塩基フレームシフト変異の修復効率は一塩基置換変異の修復効率の数十分の一であった。また、5'-tailed duplexと3'-tailed duplexの序列については、明らかではなかった。

Research Products

• [Presentation] Tailed duplexを用いたフレームシフト変異の修復 (2010)
  • Author(s): 守田由子, 原島秀吉, 紙谷浩之
  • Organizer: 第33回日本分子生物学会年会・第83回日本生化学会大会合同大会
  • Place of Presentation: 神戸
  • Year and Date: 2010-12-07
• [Presentation] Pinpoint sequence alteration of a chromosomal locus in mouse liver (2010)
  • Author(s): H.Kamiya, M.Uchiyama, J.Piao, Y.Nakatsu, T.Tsuzuki, H.Harashima
  • Organizer: 37th International Symposium on Nucleic Acids Chemistry
  • Place of Presentation: 横浜
  • Year and Date: 2010-11-10
• [Presentation] マウス肝臓における遺伝子修復(部位特異的配列変換) (2010)
  • Author(s): 紙谷浩之, 内山雅普, J.Piao, 中津可道, 續輝久, 原島秀吉
  • Organizer: 第26回日本DDS学会
  • Place of Presentation: 大阪
  • Year and Date: 2010-06-18
• [Presentation] 遺伝子修復核酸 5'-tailed duplexの開発 (2010)
  • Author(s): 紙谷浩之
  • Organizer: 遺伝子・デリバリー研究会 第10回シンポジウム
  • Place of Presentation: 札幌
  • Year and Date: 2010-06-02
• [Presentation] Gene correction in mouse liver (2010)
  • Author(s): H.Kamiya, M.Uchiyama, J.Piao, Y.Nakatsu, T.Tsuzuki, H.Harashima
  • Organizer: 13th Annual Meeting of the American Society of Gene & Cell Therapy
  • Place of Presentation: Washington D.C., USA
  • Year and Date: 2010-05-20