2011 Fiscal Year Annual Research Report
人工マイクロRNAによる個体レベルでの制御下アレル特異的発現抑制系の開発
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21659084
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| Research Institution | Kyushu University |
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Principal Investigator |
服巻 保幸 九州大学, 生体防御医学研究所, 教授 (90128083)
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| Keywords | マイクロRNA / 発現抑制 / 遺伝子変異 / アレル特異的 |
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| Research Abstract |
昨年度HeLa細胞によるtransient expressionの系により、アレル特異的な抑制効果が得られた。そこで、並列して設定する人工的なpre-miRNA配列カセットであるAMPM(artificial miRNA precursor motif)による本来のターゲットサイトに対する抑制効果増強の可能性を検討するため、上記変異領域以外の領域(3'-UTR)をターゲットとしたミスマッチpre-miRNA配列を持つAMPMを用いて同様な解析を行った。しかし、却って抑制効果の減少が見られ、当初予想した抑制増強効果は得られなかった。一方、(Creの導入によるコンディショナルな個体レベルでの抑制系の解析を進めるため、すでに細胞レベルでの抑制効果を見出しているSmad2,3に対する並列したAMPMを用いてloxp配列で挟み込んだNeo遺伝子(3'側にMAZ配列を4コピー設定している)をCAGプロモーターとAMPM-EYFP遺伝子間に逆向きに挿入したコンストラクトを作成した。このスイッチングベクターをマウスES細胞に導入してトランスジェニックES細胞を作成した。この細胞に組換えアデノウイルスを用いてCre recombinaseを発現させたところ、Cre recombinase導入前と比較してEYFPの発現強度が増強し、人工miRNAの発現とそれに伴う標的遺伝子の抑制が見られた。以上の結果から、人工miRNAの発現を制御する転写スイッチングシステムを確立することができたと考える。今後は、トランスジェニックES細胞を用いてトランスジェニックマウスを作成し、個体レベルでの人工miRNAスイッチングシステムの機能評価が必要である。
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Research Products
(4 results)
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[Journal Article] Partial SPAST and DPY30 deletions in a Japanese spastic paraplegia type 4 family2011
Author(s)
Miura, S., Shibata, H., Kida, H., Noda, K., Toyama, T., Iwasaki, N., Iwaki, A., Ayabe, M., Aizawa, H., Taniwaki, T. and Fukumaki, Y.
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Journal Title
Neurogenetics
Volume: 12
Pages: 25-31
DOI
Peer Reviewed
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[Presentation] Exome sequencing approach to identify the responsible variant for a novel type of hereditary motor and sensory neuropathy with proximal dominancy in the lower extremities found in a Japanese descent2011
Author(s)
Shibata, H., Miura, S., Kida, H., Neda, K., Kaku, Y., Iwaki, A., Ayabe, M., Taniwaki, T. and Fukumaki, Y.
Organizer
The 12th International Congress of Human Genetics/The 61st Annual Meeting of The American Society of Human Genetics
Place of Presentation
Montreal, Canada
Year and Date
20111011-15
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