2009 Fiscal Year Annual Research Report
ケミカルシャペロン療法のための革新的スクリーニング法の開発
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21659257
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| Research Institution | Tottori University |
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Principal Investigator |
難波 栄二 Tottori University, 生命機能研究支援センター, 教授 (40237631)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
檜垣 克美 鳥取大学, 生命機能研究支援センター, 准教授 (90294321)
榊原 康文 慶応大学, 理工学部, 教授 (10287427)
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| Keywords | 小児神経学 / 治療法開発 / 低分子化合物 |
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| Research Abstract |
遺伝性ライソゾーム病の脳病態に対する根本的な治療法は現在まで存在しない。ケミカルシャペロン療法とは、基質競合阻害活性を持つ低分子化合物(ケミカルシャペロン)を細胞内で変異酵素蛋白質に結合させることで、構造的に安定化し、小胞体分解を逃れライソゾームへの輸送を促進することで変異酵素活性を上昇させ治療効果を上げる新しい治療法として注目されている。これまで私たちのグループを含め、複数の活性化合物の同定に成功しているが、本研究課題では新規化合物検索のための効率的なスクリーニング法の開発研究を行った。本年度はライソゾーム加水分解酵素β-ガラクトシダーゼのC末に分泌型ルシフェラーゼを融合した発現ベクターを作製し、一過性発現実験を行った。COS7細胞に一過性に遺伝子導入後、NH4Clを含む培養液で24時間培養し、培養液中に分泌されたβ-ガラクトシダーゼ酵素蛋白質をルシフェラーゼアッセイにより検出することができた。また、既存のシャペロン分子による変異酵素の残存活性に対する上昇効果についても同様にルシフェラーゼアッセイにより検出できた。今後は、ニーマン・ピック病C型や他のライソゾーム酵素に対して同様の発現ベクターを構築し、応用してゆく。また、この方法では、生細胞でシャペロン活性を測定することが可能となり、効率的な化合物ライブラリーのスクリーニングが可能となる。来年度は、実際にFDA認可化合物ライブラリーなどのスクリーニングを行い、そこでヒットした化合物については、インシリコ解析を行い、可能物の最適化を行う予定である。
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[Journal Article]2009
Author(s)
檜垣克美、難波栄二
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Journal Title
生体の科学 特集 脳と糖脂質「ガングリオシド蓄積症とシグナル伝達」((財)金原一郎記念医学医療振興財団/医学書院)
Pages: 210-216
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