2009 Fiscal Year Annual Research Report
解糖系異常亢進を惹起する肺癌特異的スプライシングスイッチング-新規診断法の開発-
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21659333
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| Research Institution | Miyagi Cancer Center Research Institute |
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Principal Investigator |
佐藤 雅美 Miyagi Cancer Center Research Institute, 薬物療法学部, 特任研究員 (30250830)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
田沼 延公 宮城県立がんセンター(研究所), 薬物療法学部, 研究員 (40333645)
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| Keywords | 肺癌 / 遺伝子発現 / スプライシング / 解糖系酵素 / 低酸素 / 組織バンク / ワールブルグ効果 / モノクロナル抗体 |
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| Research Abstract |
1.PKM遺伝子スプライシング異常を指標とした新規診断法の確立
(1)我々はピルビン酸キナーゼ(PKM)が肺癌において、M1→M2のスプライシング異常を起していることと見出した。検定をより大きな母集団で行うため、引き続き、手術検体に関してスプライシング異常の有無を調べた。スプライシングが以下の点で相関が認められるか否かを検討した。
・癌組織型との相関性、・TNM因子やstageとの相関性、・再発率や予後との関連
・肺癌で既知の遺伝子変異との相関など
2.スプライシング異常の新しいスクリーニングシステムの樹立
この診断を術中迅速診断や、喀痰検査や血清検査での腫瘍マーカーへの応用を図るために、PKM1およびPKM2のそれぞれに対する抗体作製が必要となった。
(1)PKM1およびPKM2に特異的なアミノ酸に対する合成ペプチドを合成し、これを抗原としてラットに免疫した。
(2)腸骨リンパ節を採取してミエローマとの細胞融合を行ってハイブリドーマを得た。
(3)目的とする抗体を産生するハイブリドーマをスクリーニングで同定しクローン化した。
(4)クローン化したハイブリドーマを大量培養し、モノクロナル抗体を精製した。
3.PKM遺伝子スプライシング異常を引き起こす分子機構の解析
(1)発がん性遺伝子導入により、スプライシング異常が誘導されるか否かを検討した。
(2)M1→M2の変化を同定可能な可視化システムの構築を開始した。
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