2010 Fiscal Year Annual Research Report
| Project/Area Number |
21700412
|
|---|
| Research Institution | Yokohama City University |
|---|
Principal Investigator |
竹本 研 横浜市立大学, 医学部, 助教 (80466432)
|
|---|
| Keywords | イメージング |
|---|
| Research Abstract |
昨年度までに、GFP融合GluR1に対してエオシンラベルした抗GFP抗体を用いてCALIによる光照射依存的機能破壊の技術を開発した。今年度は本技術の特異性等について解析を進めた。まずCHO細胞にGFP-GluR1とNMDA受容体(NR1A/2B)を共発現し、グルタミン酸添加によるAMPA電流及びNMDA電流を測定する実験系を構築した。ここでCALIの前後で機能破壊の特異性を解析したところ、AMPA電流のみを特異的に機能破壊することが分かった。さらに海馬初代培養ニューロンにおいても同様な高い特異性が認められた。これらの実験はグルタミン酸添加によるものであり、シナプス性電流を抑制した結果であるかは不明である。さらに抗体がシナプスクレフトに入り込むかも大きな問題となる。そこで海馬初代培養ニューロンを培養したガラスに刺激電極を設置することでシナプス電流を発生させる実験系を構築し、CALIの効果を解析したところ、光照射依存的にAMPA電流のみが特異的に抑制できることがわかった。以上からエオシンラベルした抗体は、シナプスクレフトに入り込みCALIが可能であることが示された。また昨年度に引き続き、内在性GluR1細胞外ドメインに対する抗体のスクリーニングを続け、生きた細胞に発現させたGluR1を認識する抗体を見出した。今後はCALIが可能かなどを解析し、将来的にin vivoで使用する抗体を決定したい。
|
-
-
[Journal Article] Serotonin mediates cross-modal reorganization of cortical circuits.2011
Author(s)
Jitsuki S, Takemoto K, Kawasaki T, Tada T, Takahashi A, Becamel C, Sano A, Yuzaki M, Zukin RS, Ziff EB, Kessels HW, Takahashi T.
-
Journal Title
Neuron
Volume: 69
Pages: 780-792
Peer Reviewed
-
-
